染色流程
細胞化學染色固定有物理法與化學法，物理法為乾燥和火焰固定，化學法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。
（二）顯示
1、偶氮偶聯法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，產生分解產物，再與重氮鹽結合引起偶氮偶聯，使其形成不溶性的偶氮色素，以此證明酶的存在。
2、聯苯胺法：粒細胞和單核細胞中的過氧化物酶作用於過氧化氫，釋放新生態氧，使無色的聯苯胺形成藍色沉澱。
3、普魯士藍法：細胞內、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成藍色亞鐵氰化鐵沉澱。
細胞化學染色4、雪夫反應：過碘酸氧化細胞內糖類中乙二醇基形成乙醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉澱。
5、金屬沉著法：其他尚有物理學方法，如脂溶性染料染色（顯示脂質）、螢光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用於臨床血液細胞學診斷。
（三）細胞化學定量
粗略估量，以染色反的強弱，受色的深淺，人為地區別為陰性和各種程度的陽性。
百分法，只能反映細胞陽性率，不能反映受色強弱。
積分法，是常用的半定量法，將等級估量與百分率相結合它既反映了細胞陽性率的高低，又反映了細胞受色的強弱。
過氧化物酶染色
過氧化物酶染色原理
粒細胞和單核細胞的胞漿內的髓過氧化物酶（POXorMPO）分解過氧化氫，釋放新生態氧，使無色聯苯胺氧化成藍色聯苯胺，後者進一步變成棕色化合物沉著於細胞質內。
試劑
1%TMB、亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液、1%過氧化氫溶液、稀過氧w化氫溶液、瑞氏染色液
操作
1、取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10ml，溶液呈淡棕黃色。
2、在新鮮乾燥的血片上，加混合溶液0.5ml,放置lmin後，再加稀過氧化氫溶液0.7ml，染色6min。
3.瑞氏染液復染15～20min。
4.油鏡鏡檢。
結果
細胞質內有藍黑色顆粒者為陽性。
（－）無顆粒沉著；
（±）顆粒細小，分布稀疏；
（+）顆粒較粗，局灶分布；
（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質1/2~2/3；
（+++）顆粒粗大，呈團塊分布；
（++++）全部胞質均部滿顆粒，可覆胞核。
臨床意義
POX主要分布在粒細胞和單核細胞內，隨著粒細胞成熟的程度而逐漸增強，中性分葉核粒細胞為強陽性。嗜酸性粒細胞陽性程度最強，其陽性顆粒比中性粒細胞粗大，有折光。鹼性粒細胞為陰性。
（2）單核細胞：
原始單核細胞為陰性反應，幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應，顆粒細小，彌散分布。
（3）其他細胞
淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、組織細胞、巨核細胞均呈陰性反應。
（4）血小板過氧化物酶
主要定位於幼稚型巨核細胞的核膜上，可作為原巨核細胞的一種標誌物，有助於FABM7的識別。
（5）過氧化物酶染色
主要用於鑑別急性白血病類型，急性髓細胞白血病多呈陽性反，以M3和M2型反應最強，MI和M5型反較弱，S故有助於區別M3和M5型。S急性淋巴細胞白血病呈POX陰性反，故為急性髓細胞和淋巴細胞白血病鑑別的重要指標。
蘇丹黑B染色
蘇丹黑B染色試劑
1.10%甲醛液。2.蘇丹黑B乙醇溶液
操作
1．乾燥血片或骨髓片在甲醛蒸氣中固定。
2．自來水沖洗。
3．放人染色液中，37℃染色30~60min。
4．用70%乙醇脫色1~2min，水洗lmin。
5．瑞氏染液復染20~30min。
結果
脂類呈黑色或棕黑色顆粒，定位於細胞漿中
（+）顆粒很小，細小、稀疏，或胞質局部面積的1/4有緻密的顆粒。
（++）顆粒較少，或胞質面積的1/2出現黑色顆粒。
（+++）顆粒較密，或胞質面積的3/4出現黑色顆粒。
（++++）顆粒極密，顆粒間無間隙。
臨床意義
1.粒細胞系
早幼粒及以下階段隨著細胞成熟，陽性顆粒逐漸增加。早期原粒細胞一般為陰性，少數細小點狀顆粒代表線粒體被染色晚期原粒細胞可出現陽性顆粒，其顆粒限於胞漿的某一區域。
2.單核細胞系
陽性，顆粒細小，分布彌散，形狀不規則。原單核細胞為陰性。
3．紅細胞系、淋巴細胞系均呈陰性反應。
4．尼曼一匹克細胞和戈謝細胞均為陽性反應。
5．蘇丹黑B和過氧化物酶染色臨床意義相似，主要用於急性白血病類型的鑑別。蘇丹黑B染色較過氧化物酶染色更敏感，但特異性不如過氧化物酶染色（極少數急性淋巴細胞白血病可為陽性）。
過碘酸一雪夫染色
過碘酸一雪夫（PAS)染色胞漿記憶體在糖原或多糖類物質（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）經過碘酸（periodicacid）氧化，轉變為二醛基（CHO-CHO），與雪夫(Schiff)試劑中的無色品紅結合，形成紫紅色染料而沉積於胞漿中。該反應稱為過碘酸一雪夫(PAS)陽性反應。
結果
（1）粒細胞系：
原粒細胞多呈陰性反應，也可弱陽性。自早幼粒細胞以後隨著細胞的成熟程度，陽性反應逐漸增強。嗜酸粒細胞顆粒本不著色，但顆粒間的胞質呈瀰漫性陽性反應；嗜鹼粒細胞為陽性反，顆粒紫紅色，大小不一。
中性粒細胞糖原含量參考標準
（-）胞質無顆粒做生物
（+）胞質呈淡紅色，無顆粒
（++）胞質呈紅色，有少量顆粒
（+++）胞質呈暗紅色，顆粒較密
（++++）胞質呈紫紅色，顆粒極密
（2）淋巴細胞系：
大多數淋巴細胞呈陰性反應，少數為（+）的陽性反應。
淋巴細胞糖原含量程度參考標準
（-）胞質內無顆粒
（+）物胞質內有顆粒
（++）有較粗紅色顆粒
（+++）有粗大紅色顆粒
（++++）顆粒粗大並有紅色塊狀
（3）紅細胞系：
幼紅細胞和紅細胞呈陰性反應
紅細胞系列糖原含量程度參考標準
（-）胞質無顆粒om
（+）有少數紅色顆粒
（++）有較粗紅色顆粒或瀰漫紅色
（+++）有粗大紅色顆粒或深紅色
（++++）有粗大紅色塊狀或紫紅色
巨噬細胞巨核細胞和血小板染色反均為陽性
巨核細胞糖原含量程度參考標準
（-）胞質無顆粒
（+）少量糖原包涵體
（++）中等量糖原包涵體，定位於核膜出或分散胞質中，占胞質1/3
（+++）大量糖原包涵體分散於胞質的1/2
（++++）糖原包涵體充滿整個胞質
（5）單核細胞呈陰性或陽性，顆粒細小，往往位於胞質邊緣；
漿細胞大多呈陰性，少數為紅色顆粒陽性；組織細胞為陰性反應；巨噬細胞可呈陽性，為紅色顆粒反應。
臨床意義
（1）M6與巨幼貧的鑑別
M6的幼紅細胞PAS可呈強陽性，積分明顯增高，巨貧、再障、溶貧時PAS反應為陰性。
（2）急性白血病的類型鑑別ALL，PAS呈大塊狀陽性，也可是陰性，AML為陰性，急性單核細胞白血病時原單核細胞及幼單核細胞PAS陽性，積分增高，陽性顆粒小而多，呈彌散分布。
（3）巨核細胞和Sternberg細胞鑑別巨核細胞PAS強陽性，Sternberg細胞為陰性或弱陽性。
（4）戈謝氏細胞強陽性，尼曼-皮克細胞陰性或弱陽性。
（5）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴細胞的糖原積分增高；一般的病毒感染，糖原積分在正常範圍內。
鹼性磷酸酶染色
中性粒細胞鹼性磷酸酶染色原理
中性粒細胞胞漿中的鹼性磷酸酶在pH9.2~9.8緩衝液中，能水解磷酸萘酚鈉，並釋放出磷酸與萘酚。再以重氮鹽與萘酚偶聯成不溶性有色偶氮染料沉澱於胞漿中。
結果
堅牢藍RR陽性為紫黑色顆粒，堅牢紫醬GBC陽性為棕紅色沉澱。
一”陰性反，胞漿中無陽性染色顆粒。
＋”胞漿中含有少量顆粒或呈彌散淺紅色（或彌散紫色）。
2＋”胞漿中含有中等量顆粒或彌散受色。
3＋”胞漿中有豐富的顆粒或彌散深色，胞核清晰。
4＋”有極豐富的粗大顆粒，充滿胞漿，或彌散深色，胞核不清晰。
臨床意義
（1）生理變化：新生兒NAP增高，成人較兒童減低，老人更低；激烈運動增高；月經期經前增高，行經後降低，經後期恢復正常；妊娠期2-3月輕度增高，以後逐漸增高，分娩時達到高峰，產後恢復正常。
（2）、病理變化
增高：嚴重化膿性感染、類白血病反、AA、CML加速期、ALL、CLL、惡性淋巴瘤、癌轉移、MM、真紅、骨髓纖維化等。減低：PNH、CML、惡性組織細胞病、MDS。
（3）疾病鑑別診斷
慢粒與類白的鑑別：CML減低，類白增高。
急性白血病的鑑別：AML減低，ALL增高。
PNH與AA鑑別：PNH減低，AA增高。
病原微生物的鑑別：病毒感染減低，細菌感染增高。
