雞卵類粘蛋白
雞卵類粘蛋白(chicken ovomucoid 簡稱chom)是由雞卵清中製成的一種糖蛋白,是一種專一性很強的胰蛋白酶的抑制劑,對豬和牛的胰蛋白酶有很強的抑制作用(而對胰凝乳蛋白酶無抑制作用)。雞卵類粘蛋白(ovomucoid,CHOM)在pH7.8~8的鹼性條件下,具有很強的結合胰蛋白酶的活性,而且這種結合是可逆的。所以將CHOM連線到層析介質載體上,用含有胰蛋白酶和雜蛋白的混合液過柱,就可以將胰蛋白酶吸附在柱上,從而與其它成分分離開來,然後用酸性溶液即可將純的胰蛋白酶洗脫下來。
雞卵類粘蛋白具有強烈的抑制胰蛋白酶的作用;胰蛋白酶能水解酯鍵,醯胺鍵和肽鍵,利用這一性質用人工合成的底物或天然的蛋白質可以測定胰蛋白酶的活力,由此可計算卵類粘蛋白的活力.
實驗流程
卵類粘蛋白的抽提(活力測定)→分子篩層析(凝膠預處理→裝柱→平衡→上樣→洗脫→收集蛋白峰→活力測定)→離子交換層析(活力測定)→透析→丙酮沉澱→離心(活力測定)