密度突變株
篩選突變株突變品系
實驗小鼠該鼠與人類有相似的肌萎縮症狀，其dy/dy大約出生兩星期可見後肢拖地，表現有進行性肌衰弱和廣泛性的肌萎縮。病鼠出生時是活的，但只有少數病鼠能存活10周以上，無繁殖力。但已證明dy/dy雌鼠的卵巢移植到正常雌鼠體內是具有生殖能力的。由於雌本基本不育。因交配無能，且母性不好，一般和留雜合型，如雄鼠與正常雌本交配有困難，可人工受精，也可卵巢移植。常用的有REJ129/dy後肢偏癱小鼠。
（二）肥胖症（Obese,簡稱ob）鼠
肥胖症鼠有肥胖小鼠（ObeseMice）和肥胖大鼠（ObeseRat）。肥胖小鼠體重可達60克，這種小鼠無生育力，表現為單純胖而不伴有糠尿病。純合體大約在四周齡時即可識別出，此時其增重加速，很快可達到正常同窩鼠體重的3倍。中等程度的攝食過度可使其幾乎不太活動，但在幼年時其血糖和免疫活性胰島素並不明顯增加，5～6月齡以後，肥胖趨向穩定，胰島素和葡萄糖水平上升，這些小鼠不受外來胰島素的影響，但節制食物可增加對胰島素的敏感性以及延長其壽命。所有的雌鼠均無生殖力。卵巢和子宮萎縮，若堅持節制飲食，則雄鼠偶爾能夠繁殖。Langerhans島的增生與胰島素分泌增加有關，腎小球發生腎結節狀脂肪玻璃樣病變，在電鏡下可見了其局限於腎小球膜和基膜的內皮面。肥胖小鼠的皮下、後腹膜和性腺的脂肪增多，這是脂肪細胞數目增多和體積增加的結果，因此被稱為肥大性一增生性肥胖症。
定點突變在紐西蘭小鼠中也表現一種肥胖症叫NZO（NewZealandObese）。該鼠通常具有生殖能力，所有的小鼠均發生肥胖，但脂肪沉積主要是在腹內，於2～4月齡時即可發現脂肪沉積，最終達到總體重的70%，高血糖不明顯，但胰島素的水平升高。在快速增重期間，食物的攝入量明顯的增加。此外，還有一種肥胖Fatty，基因符號為fa，肥胖同時有糖尿病，受孕率低。日本KK小鼠也發生肥胖。從小鼠的肥胖症知道，肥胖症有不同的遺傳型。這對研究人類肥胖症的一系列問題頗有助益。
（三）侏儒症（DwarfMice，簡稱dw）鼠或稱矮小畸形鼠
這種畸形又稱垂體性侏儒症（PituiaryDwarfism），因為其缺乏腦下垂體前葉的生長素和促甲狀腺激素，故使生長發育障礙。純合子dw/dw小鼠在12～13月齡時即可被識別，它表現為短尾和短鼻，到成熟年齡時，其體積約為同窩正常鼠的1/4，8周齡時體重為8～10克，儘管多數能存活到成熟期，但雄鼠和雌鼠均無生殖力，可出現繼發的粘液性水腫。給病鼠食入垂體前葉碎片可以使生長速度基本正常。
由於該鼠無生育能力，兩性均不育，所以只能用雜合子把基因保留下來，這樣只能得到25%的矮小畸形鼠於，9月鼠齡時將正常垂體移植到這種鼠的腎臟，在雄鼠可長大到近於正常小鼠體形並可繁殖（但在雌鼠收不到效果，原因不明）。這種突變型小鼠在內分泌研究上有較大用處，如對“生長素”等進行分析研究等。
四）糖尿病（Deabetes，簡稱db）鼠
由Hummel等（1966）最先報導，它是由單隱性突變基因引起，自發於Jackson實驗室的近交系小鼠（C57BL/Ks），該基因（db）與肥胖（ob）不是等位基因，儘管它們的表現型特徵相似，db/db基因鼠的第一個表現是當病鼠到3～4周齡時，腋和腹股溝皮下組織出現脂肪的異常沉積，此時血糖升高，從200mg/100ml血以下的正常水平上升到一年齡時的682mg/100ml血（平均為563.2mg/100ml血）。雌鼠無生殖力，但其卵巢移植到其它鼠後仍能恢復生殖活性。多數鼠不能存在到8個月以上，但若在病的早期節制飲食則可延長其生命。
臨床症狀包括肥胖、高血糖、糖尿、蛋白尿、煩渴、多尿，最後可因酮尿而死亡。死後變化包括胰島細胞中具有很少β顛粒和胰管腫脹。Like(1972)描述了db/db小鼠腎小球的變化，在外形上與同齡正常小鼠的一樣，但比後者大得多，小鼠到了糖尿病發病年齡時，腎小球膜變化更加明顯，外周基層持續增厚，並生有許多小結，還認為多尿可能是高血糖對腎小球產生利尿作用的結果。
（五）骨骼硬化症（Ostepetrosis，簡稱op）鼠
發生於侏儒症(dwarf)小鼠。這個隱性基因（op）位於第12號染色體上。大約10日齡時（op/op）即可識別出，其頭呈圓頂狀，腳短，門齒缺如，主要的骨骼缺陷是骨重建不良造成的，在出生前後6周最明顯、隨著小鼠的成長，骨形成減速，重建時骨的消除與形成的速度幾乎相等，因此症狀表現比較微，病鼠的破骨細胞較同窩正常鼠為小，酸性磷酸酶出現於整個細胞，而不是僅集中在破骨細胞和骨頭的界面上。
op/op小鼠的長骨受到的影響最大，至少在出生後的6個月裡，骨髓腔閉合，出現原始的海棉骨，病鼠的骨片似乎比同窩正常鼠密實，當病鼠到6～10月齡時骨髓腔重新出現，並充滿正常的造血成分，其中巨核細胞的數目增多。與其它骨硬化突變體不同，它們不伴隨色素異常，因此不同於小眼畸形（Microphthalmia）mi/mi;和灰色-致死(Grey-Lethal)gl/gl小鼠。op/op突變體生存的時間較長,骨骼的病變可隨小鼠的成長而消失,在骨骼病變消除前,骨基質形成和甲狀腺濾泡旁細胞水平的比率大幅度下降。
由於病鼠骨質生長異常，骨質硬，骨髓腔消失，所有骨骼都硬化，並伴有無齒症。因此往往在同窩仔鼠中發現死亡仔鼠。第二窩才出現斷奶後死亡的小鼠無牙齒，系因不能吃食而死亡，但於斷奶後餵軟飼料可保留下來。op為隱性基因，無齒型發生於肥胖型父母，第二代出現無齒。正常時上下頜骨有牙齒的主要發點，骨硬化症時有生長牙齒的生髮點，但因骨質硬而不能長出。這種鼠的病變的與人類大理石骨病相似。
治療方法有：
1．聯體生活（Parbiosis）：可使部分動物得到治療，一個月可治癒。
2．骨髓移植（BoneMarrowGrafts）：對人類用此種方法。此病病因不明，病人造血機能發生變化。此種動物可用作研究人類骨髓硬化症的模型。
實驗小鼠因為斑的大小是指白斑（WhiteSpotting）大小，所以縮寫為W。正常時是小寫ww，當呈WW時則表現出貧血。在W處有五個等位基因，任何兩個等位基因都可引起嚴重的大紅細胞性、發育不全性貧血，同時引起肝臟造血功能障礙。貧血的嚴重性受環境和基因型影響。可出現不同類型的突變體，如W/+，Wv/+,Wv/Wv,W/Wv,W/WJ,WJ,WN等。這些突變體均無生育力，表現為黑眼，白色。
WW出生後只能存活幾天，當有修飾基因存在時，則Ww呈部分顯性，可出現90～98%白斑；如無修飾基因存在，則呈現純白，但為黑眼；如有一些修飾基因存在可出現不同程度的花斑。W是一組復等位基因，如Wv的v是Viable（活）的意思。WvWv可活到成年，為白色、黑眼，通常是不育的，偶然表現出有限的生育力，其紅細胞只有正常的半數，與人類貧血相似。
用於造血系統研究的突變小鼠有：
1．W突變（DominantSpotting）小鼠
⑴W/Wv：遺傳性貧血小鼠，能活到成年，如WBB6F1/J-W/Wv小鼠。
⑵+/+：非貧血小鼠，紅細胞計數正常，如WBB6F1/J-+/+小鼠。
⑶W/W：遺傳性貧血小鼠，造血幹細胞正常，是造血微環境發生缺陷的小鼠。
⑷W/Wa：遺傳性貧血小鼠，造血微環境正常，是造血幹細胞發生缺陷的小鼠。
2．an突變（Hentwig′sAnemia）小鼠。
大紅細胞性貧血，貧血嚴重程度隨遺傳背景不同而異，妊娠的第12天開始發生的造血功能缺陷，伴有白細胞減少症。
3．f突變（Flexed-Tail）小鼠：
高鐵紅細胞性貧血，貧血變化是由於胎兒肝臟造血障礙所致，因此出生時即發生貧血。此種小鼠，表現為尾彎曲。
4．JO（Joundice）突變小鼠，妊娠第14天出現貧血，出生後幾小時出現黃疸，新生期常因腦受損、黃疸、膽紅素毒血症或缺氧症而死亡，血循環中出現小網狀紅細胞和有核紅細胞。
5．ha(HemolyticAnemia)突變小鼠：新生期溶血性貧血，多於妊娠14天時出現。新生期黃疸，多數死於出生後的一周內。
6．Sph(Spherocytosis)突變小鼠：有溶血性貧血、球形紅細胞症、膽紅素過多血症，出生後短期內死亡。
7．Sla(Sex-LinkedAnemia)突變小鼠：表現為輕度貧血、網狀紅細胞症、骨髓缺乏。兩性生長均受阻，但能存活。
8．dm(Diminutive)突變小鼠：dm/dm鼠體小、尾短且扭曲，肋骨和骶骨前脊椎增加，脊椎畸形，肋骨節融合，大細胞性貧血。
9．Ts(Tail-Short)突變小鼠：Ts/Ts小鼠常死於子宮中，到妊娠的第8天，表現為尾短且扭曲以及其他骨骼異常，生前貧血以及卵黃囊造血障礙，貧血還可導致其它異常。
（七）白內障（Catarct,簡稱Cat）突變鼠
這是顯性遺傳，10月齡至14周齡時晶狀體混濁，還會發生晶狀體液化和核的上超咬合。當Cat呈雜合狀態時出現白內障。這種性狀在一般情況下很容易觀察到，可作為眼科的動物模型。
（八）無脾（Asplenia，簡稱As）突變鼠
該鼠脾臟完全缺如，它作為一個遺傳性疾病出現於顯性半肢畸形的雜合子小鼠。這些小鼠已被廣泛套用於脾臟功能的研究，也是研究中醫中藥的重要動物模型，還是研究血吸蟲病的良好實驗材料。
（九）灰色致死（Grey-Lethal，簡稱Gl）突變鼠
gl/gl突變鼠除顯純灰色外，很主要的性狀是生長障礙，出現14天后即比正常為小。牙不萌、形態不正常、牙齒不鈣化。肢體長骨不正常。一般死於22～30日齡，利用其骨骼系統的障礙，有人用作鍶的代謝研究。
（十）視網膜退化（ReinalDegeneration，簡稱rd）突變鼠
此種病鼠與人類的色素性視網膜炎相似，人類的色素性視網膜炎也是一種遺傳病，呈現進行性視網膜硬化，有色素沉著及視網膜血管閉鎖萎縮。人類這種病例很難取得標本進行病理等研究，而動物模型則提供了極為理想的實驗材料，還可進行其它一系列研究。
（十一）淡化致死基因（Dilte-Lethal，簡稱aL）突變鼠
dLdL除淡化的性狀外，還有驚厥、癱瘓，大約死於生後三星期。後來有人發現這種病的苯丙氨酸氫氧酶的活性大大下降，因此此模型相似人類的苯酮尿病。
（十二）針尾（pintail，簡稱Pt）突變鼠
當Pt+雜合狀態就呈現顯性突變性狀，見削短與捲曲的尾巴，且椎間盤逐齡產生快速退化，這就類似人類的椎間盤突出症，可用於這方面研究。
（十三）少趾症（Hypodactyly，簡稱Hd）突變鼠
該鼠兩前肢有足趾各2個，兩後肢有足趾各4個。雄鼠少趾症同時出現精子缺乏（OIigospermia）。雌鼠生育力正常。少趾與精子缺乏相關共存是一個有興趣的現象。裸鼠亦有類似情況。無毛時生育力低下，其中關係尚未搞清。可能與多型性（Pleomorphic）基因或伴性（Sexlinkage）基因相關。只見於小鼠和大鼠，原因不明。
（十四）高血壓突變型大鼠（HypertensionRat）
高血壓大鼠生育力強，對壽命也明顯影響，可養13-14個月，Okamoto培育了許多亞系，以SHR最為名貴。
SHR（SpoataneouslyHypertensiveRats）即自發性高血壓大鼠，是由Okamoto和Aoki選育成功的。正常大鼠收縮壓110-120mmHg，開始用♂145-175mmHg×♀130-140mmHg作為親代，以後兄妹交配。育成的高血壓大鼠出生後5周血壓可達150mmHg，而成年雄鼠的血壓達200mmHg，其特點是高血壓自發率為100%，血壓平均170-180mmHg，最高達200mmHg，並有高血壓性心血管病變。繁殖時每代都要選血壓高的動物（高於180mmHg）作為繁殖鼠種。
（十五）癲癇突變型大鼠（AudiogenicSeizures聲源癲癇發作）
用鈴響聲刺激會鏇轉起舞數秒鐘，然後一側倒地發作癲癇，與人類癲癇相似。可用此種鼠作動物模型來研究人類癲癇病。中國醫學科學院生理研究所和北醫均有飼料。
酵母突變株篩選
基因突變1.1材料
1.1菌株和質粒大腸桿菌菌株DH5α為本室保存；酵母菌株INVSc1購自Invitrogen公司，其遺傳型與表型Genotype:MET/METahis3△1/his3△1leu2/leu2trp1-289/trp1-289ura3-52/ura3-52Phenotype:His,Leu,Trp,Ura.pHSS6酵母-大腸桿菌穿梭質粒（在pHSS6的插入片段中含有mTn-3xHA/lacZ同源重組子）由美國Yale大學SnyderM教授惠贈。
1.2方法
1.2.1鋪板，用50μg/mL卡那黴素或/和3μg/mL四環素篩選抗性克隆，37℃12~20h。以LB洗下克隆，適當稀釋，部分以甘油凍存.適當稀釋後，接種於50mLLB-50μg/mL卡那黴素和/或3μg/mL四環素，37℃培養6h至指數生長期。
1.2.2質粒的提取、純化及檢測常規方法中提或大提質粒，純化質粒,電泳分析，紫外分光光度計OD260/280檢測。部分經酒精沉澱保存。
1.2.3酵母轉化取3μg純化的質粒，經NotI內切酶消化(根據內切酶附說明書)，電泳，培養10mLINVSc1酵母菌至指數生長期（30℃，36~48h），OD600=1，離心收集細胞，以5mL轉化緩衝液清洗一次（轉化buffer:0.2mol/LLiAC,40%PEG4000,100μmol/Lβ-ME(巰基乙醇)）。將細胞重新懸浮於1mL轉化緩衝液中，含1mg變性鮭魚精子DNA，混勻後，100μL/管分裝於新的Eppendorf管中，每管加入以NotI消化後的質粒DNA0.5μg,徹底混勻後，於45℃，孵育30min。細胞經離心收集，懸浮於400μL的SC-ura,用200μL鋪板，於30℃，2d。
1.2.4LacZ基因的表達為檢測LacZ基因的表達，將克隆挑選出來，鋪片於YPAD平板中，每板的密度為100個鋪片。以無菌濾紙，將上述平板複製於另一SC-ura平板上，37℃過夜。將濾紙取出，克隆面朝上，置於一密閉容器中。容器底部加入10mL氯仿，10~30min。取出濾紙，克隆面朝上，置於X-gal平板（120gX-gal,0.1mol/LNaPO4(pH7),1mmol/LMgSO4,於1.6%瓊脂平板中），30℃,2d。查找X-gal陽性的克隆，從YPAD平板上重新挑取單克隆在SC-ura平板上，進行劃板培養。將擴增的酵母菌種進行凍存保存（-80℃）。取LacZ表達最強的菌株進行大規模培養。
2結果
2.1轉化株的SC-ura培養基上的生長情況
由於發生同源重組後的轉化子含有tetr抗性基因及酵母營養缺陷型選擇標記Ura3，因此可以通過SC-ura或tetr，選出我們所需的轉化株。
2.2LacZ基因的表達
若插入片段與酵母基因組讀碼框相匹配，LacZ基因編碼的β-半乳糖苷酶N端與宿主編碼的C端結合，產生生物活性與X-gal反應，生成藍色。
2.3酶切後的電泳圖
純化的質粒，經NotI酶解，應可見一條2.1kb左右的較均一的條帶（載體pHSS6)和較不均的DNA插入片段條帶（約8kb，含有mTn-3xHA/LacZ）。
