概況
兔瘟病症圖兔病毒性出血症(viralhaemorrhagicdiseaseofrabbits)又名兔出血性肺炎、兔出血症和兔瘟。是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)所致的兔的一種急性、敗血性、高度接觸傳染性、致死性和以全身實質器官出血為主要特徵的傳染病。
地理分布和危害
兔瘟剖解病變在義大利、德國、捷克、俄羅斯、西班牙、匈牙利、保加利亞、朝鮮、日本和墨西哥等國家均有本病流行的報導。1984年初在中國江蘇無錫市郊曾暴發過此病。該病主要危害兔，目前還未見其他動物發病的報導。
病原
病原兔病毒性出血症病毒是一種新發現的病毒，具有獨特的形態結構，分類學位置尚未最後定論，病毒顆粒無囊膜，直徑25～35納米，表面有短的纖突。病毒對人的O型紅細胞具有凝集性。病毒存在於病兔所有的器官組織、體液、分泌物和排泄物中，以肝、脾、肺、腎及血液含量最高。該病毒可在乳鼠體內生長增殖，引起規律性發病死亡，且可回歸兔發病死亡。因此可用乳鼠作為實驗動物模型進行種毒保存、病毒特性測定及血清中和試驗。病毒對氯仿和乙醚不敏感，能耐酸和50℃40分處理。含毒病料（如肝）保存於－8～－20℃冰櫃中560天和室內污染環境經135天仍有致病性，病毒對紫外線和乾燥等不良環境的抵抗力較強。1％氫氧化鈉4小時、1％～2％甲醛3小時、1％漂白粉3小時、2％農樂1小時才被滅活。生石灰和草木灰對病毒幾乎無作用。
流行病學
兔瘟本病只發生於家兔和野兔。各種品種和不同性別的兔都可感染髮病，長毛兔的易感性高於皮肉兔。60日齡以上的青年兔和成年兔的易感性高於2月齡以內的子兔。未斷乳的幼兔很少發病死亡。
用活毒接種兔以外的多種動物後，雞和豬未檢出抗體，牛、羊、犬、貓、豚鼠、鴨、鴿則能測出特異性抗體，倉鼠、大鼠和小鼠雖無明顯症狀，但都不同程度地有與兔相仿的組織病理學變化。這些動物有可能成為隱性帶毒者。病兔、隱性感染兔和帶毒的野兔是傳染來源。它們通過糞便、皮膚、呼吸和生殖道排毒。除病兔和健兔直接接觸傳染外，也可通過被污染的飼料、飲水、灰塵、用具、兔毛、環境以及飼養管理人員、皮毛商人和獸醫的手、衣服與鞋子等間接接觸傳播。消化道是主要的傳染途徑。皮下、肌肉、靜脈注射、滴鼻和口服等途徑人工接種，均易感染成功。
本病在新疫區多呈暴發性流行。在成年兔、肥壯兔和良種兔中的發病率和病死率都高達90％～95％甚至100％。病勢兇猛，在一個兔場或一個養兔戶，從第一隻感染兔倒斃到最後一隻兔死亡，歷時往往僅8～10天。一般疫區的平均病死率78％～85％。本病一年四季都可發生，但北方一般以冬、春寒冷季節多發。這可能與氣候寒冷，飼料單一，兔體抵抗力下降有關。
臨診症狀
兔瘟潛伏期自然病例為2-3天，人工感染為1-3天。根據病程長短可分為三種病型。
最急性型：多見於非疫區或流行初期。常發生於夜間。無任何前兆或僅表現短暫興奮，而後突然倒地，抽搐，尖叫數聲而死。
急性型：病兔表現食慾減少或拒食，精神沉鬱，被毛粗亂，結膜潮紅，體溫升高達41℃以上，稍稽留後急驟下降，臨死前病兔癱軟，不能站立，但不時掙扎，撞擊籠架，高聲尖叫，抽搐，鼻孔流出泡沫性液體，死後呈角弓反張。
慢性型：多見於老疫區或流行後期。潛伏期和病程較長，精神不振，採食減少，迅速消瘦，衰弱而死。有的可以耐過，但生長緩慢，發育較差。
據報導，病兔中約有90％的急性型病例其特徵症狀為，臨死前15分鐘至2小時內出現典型的神經症狀；許多病例臨死前肛門排出淡黃色的稀簿液狀糞便；約有15％的病例死後鼻孔流出鮮紅色的血液。
病理變化
兔瘟病毒感染後首先侵害感染兔的肝臟，在其中大量複製，干擾細胞代謝，使細胞死亡。病毒釋放入血液，發生病毒血症，引起廣泛的全身性損害，特別是引發急性彌散性血管內凝血和大量血栓形成。結果造成本病病程短促、死亡迅速和特徵性的病理變化。
眼觀變化：鼻腔、喉頭和氣管黏膜瘀血和出血。氣管和支氣管內有泡沫狀血液。肺有不同程度充血，一側或兩側有數量不等的粟粒至綠豆大的出血斑點。切開肺葉流出大量紅色泡沫狀液體。肝瘀血、腫大、質脆，被膜彌蔓性網狀壞死，而致表面呈淡黃色或灰白色條紋，切面粗糙，流出大量暗紅色血液。膽囊腫大，充滿稀薄膽汁。脾有的變化不明顯，有的充血增大2～3倍。腎皮質有散在的針尖狀出血點。心臟擴張瘀血，少數心內外膜有出血點。胸腺腫大，常出現水腫，並有散在性針尖至粟粒大出血點。胃腸多充盈。胃黏膜脫落。小腸黏膜充血、出血。膀胱積尿。孕兔子宮充血、瘀血和出血。多數雄性病例睪丸瘀血。腸系膜淋巴結和月國淋巴結水樣腫大，其他淋巴結多數充血。腦和腦膜血管瘀血，松果體和腦下垂體常有血腫。此外有些病例眼球底部常有血腫，胸水增多。
組織學變化：非化膿性腦炎，腦膜和皮層毛細血管充血及微血栓形成。肺出血、間質性肺炎、毛細血管充血、微血栓形成。肝細胞變性、壞死。腎小球出血、腎小管上皮變性、間質水腫、毛細血管有較多的微血栓形成。心肌纖維變性、壞死、肌漿溶解和纖維斷裂消失以及淋巴組織萎縮等。
診斷
兔瘟剖解病變在疫區根據流行病學特點、典型的臨診症狀和病理變化，一般可以作出診斷。在新疫區要確診可進行病毒檢查和血清學試驗。病毒檢查：取肝病料10％乳劑，超音波處理，高速離心，收集病毒，負染色後電鏡觀察。可發現一種直徑25～35納米，表面有短纖突的病毒顆粒。
血凝和血凝抑制試驗：肝病料10％乳劑，高速離心後的上清液與用生理鹽水配製的0.75％人O型紅細胞懸液進行微量血凝試驗，在4℃或25℃作用1小時，凝集價大於1：160判為陽性。再用已知陽性血清做血凝抑制試驗。如血凝作用被抑制（血凝抑制滴度大於1:80為陽性），則證實病料中含有本病毒。此外，瓊擴、ＥＬＩＳＡ及螢光抗體等試驗對本病也有診斷價值。
防治
兔瘟做好日常衛生防疫工作，嚴禁從疫區引進病兔和對外配種，定期用威島牌消毒劑帶兔噴霧或燒鹼、草木灰水消毒。預防接種兔瘟滅活疫苗，頸部或股內側皮下注射，成年兔1毫升，幼兔20毫升，注射後15-20天再免疫一次，皮下注射1毫升，免疫期約3個月。未免疫群的仔兔應在32日齡免疫，免疫群應在5日齡左右免疫。一旦發生兔瘟，應立即封鎖兔場，隔離病兔，死兔深埋或銷毀，兔舍及用具要徹底消毒，對健康兔可緊急皮下或肌肉注射高免血清，每千克體重30毫升，12天后再接種兔瘟組織滅活菌。
目前，本病無有效治療藥物，但在病初用高免血清治療，劑量成年兔3～4毫升，子兔及青年兔2～3毫升，療效較好。本病重在預防。平時堅持自繁自養，認真執行獸醫衛生防疫措施，定期消毒，禁止外人進入兔場，更不準兔及兔毛商販進兔舍購兔、剪毛。新引進的兔需要隔離飼養觀察至少2周，無病時方可入群飼養。
目前，有效的預防措施是定期預防注射臟器組織滅活苗。一年免疫二次，劑量１毫升。注射後4天即能產生高滴度的內源性干擾素，而阻止病毒複製；注苗後7～10天產生免疫力，保護力可靠。子兔20日齡開始初免。未防疫接種的兔群發生疫情時，立即封鎖疫點，暫時停止種兔調劑，關閉兔及兔產品交易市場。疫群中未病兔緊急接種疫苗，輕病兔注射高免血清，撲殺重病兔，屍體和病死兔深埋。病、死兔污染的環境和用具等徹底消毒。在非疫區發現疫點時，可考慮採取全群撲殺，或銷毀病兔、可疑病兔和可疑病兔屍體，無害處理未病兔胴體及其內臟，徹底消毒兔舍內外環境等 。
診斷技術
兔瘟在疫區根據流行病學特點，2個月以上家兔發病快、死亡率高並出現典型的臨診症狀和病理變化，一般可以作出診斷。在新疫區要確診可進行病原學檢查和血清學試驗等。
病毒檢查
取肝病料10％乳劑，超音波處理，高速離心，收集病毒，負染色後電鏡觀察，可發現一種直徑為25～35nm，表面有短纖突的病毒顆粒。
動物試驗
該病毒只感染兔，其他動物不感染。取病兔肝、脾等組織懸液的離心上清液，經雙抗處理後，以多種方式接種非免疫青年兔，可成功複製該病，並從患兔體內分離到該病毒。也可將病兔肝、脾做成1：10懸液，給試驗組兔同時注射高免血清3mi和懸液1ml，另設幾隻注射病料懸液的對照兔，如試驗組兔精神、食慾、體溫均正常，對照兔死亡，可確診是RHD。
血凝與血凝抑制試驗
肝病料lo％乳劑高速離心後的上清液與用生理鹽水配製的o．75％的人[)型紅細胞懸液進行微量血凝試驗，在4℃或25℃作用兒．凝集價大於1：160判為陽性(另外也能凝集人類B型，AB型紅細胞，呈現強烈的陽性反應)。再用已知陽性血清做血凝抑制試驗。如血凝作用被抑制(血凝抑制滴度大於l：80為陽性)，則證實病料中含有該病毒。
血凝及血凝抑制試驗快速、簡單，成熟且易於推廣，是確診該病的良好方法。因為除兔細小病毒外，尚無類似疾病的家兔病料能凝集人O型血紅細胞，並能被特異性抗體所抑制，因此也可用血凝抑制試驗測定其抗體效價，進行免疫監測。血凝試驗的方法有玻片法、血凝板法、瓷板法。
免疫擴散法
將病兔肝臟乳劑製備的抗原對感染兔血清進行瓊脂糖免疫擴散試驗，可檢出特異性抗體。戴康等發現，以甲醛滅活製備的抗原與抗血清反應時，粗提抗原可出現2～3條沉澱帶，高度提純的抗原則只出現一條沉澱帶。
紅細胞吸附病毒——螢光抗體染色法
兔瘟製備RHD高免血清，按常規法提取IgG，用F1TC標記。用l％人O型血紅細胞懸液塗片，自然乾燥，冷丙酮固定，4~C冰櫃保存備用。病料加PBS(10倍，W／V)並勻漿化(1000r／mill，3min)，將懸液3000r／mill離心30min，取上清液加於細胞塗片上，室溫吸附10min，PBS充分沖洗，曬乾後加製備的螢光抗體，置37~C濕盒中染色30min，用PBS充分沖洗，蒸餾水沖洗除鹽，乾燥後置螢光顯微鏡下觀察，可見到特異性螢光。
Dot-ELISA試驗(斑點酶聯免疫吸附試驗)按楊漢春所建立的方法進行。
判定標準為：+十為呈深棕色斑點，與強陽性相似；十為呈淺棕色斑點，與弱陽性相似；一為未呈斑點，與陰性對照相似。
分子生物學診斷技術有反轉錄——聚合酶鏈式反應(RT-PCR)Guttre等以5’末端衣殼蛋白基因為對象設計了RT-PCR和套式RTPCR，給果表明此法比ELlSA敏感10‘倍，可以檢出至少12個拷貝的病毒核酸。
在病毒性出血症檢測方面，自1984年以來相繼建立了一系列抗原、抗體檢測方法。主要有血凝(HA)和血疑抑制(H”、瓊脂擴散試驗(1D)、免疫酶組化法(BA)、ELISA法、熒抗法、斑點酶聯免疫吸附試驗(Dot-ELISA)，DNA探針法等。
雖然上述各種免疫學檢測方法在RHDV的檢測中有一些不可取代的優點，但各自仍有不足之處，或因存在不同程度的假陽性、假陰性和交叉反應，或限於實驗室所需條件，在敏感、特異、簡便、快速、實用等特點上均不夠理想。因此，在RHDV的檢測方面，急需建立符合上述特點的免疫學檢測方法，並結合分子生物學技術等多種診斷方法對兔病毒性出血症作出確診 。
