簡介
維生素B2測定就是維生素B2的測定。維生素B2又稱(維他命B2,乙種維生素二,維生素乙2,乙2素,乳黃素,Lactoflavine,卵黃素,Ovoflavin,維生素G,維生素庚,VitaminG,Beflavit,Flavitol,Riboderm,Zinvit-G)核黃素在440~500nm波長光照射下發生黃綠色螢光。在稀溶液中其螢光強度與核黃素的濃度成正比。利用矽鎂吸附劑對核黃素的吸附作用去除樣品中的干擾螢光測定的雜質，然後洗脫核黃素,測定其螢光強度。試液再加入低亞硫酸鈉（Na2S2O4），將核黃素還原為無螢光的物質，再測定試液中殘餘螢光雜質的螢光強度，兩者之差即為食品中核黃素所產生的螢光強度。
方法
矽鎂吸附劑淨化螢光法
2.方法來源
參照GB12391-1990本方法適用於食物及飼料中核黃素的測定。
3.儀器
1)高壓消毒鍋
2)電熱恆溫培養箱
3)核黃素吸附柱
4)螢光分光光度計。
4.試劑
試驗用水為蒸餾水。試劑不加說明者為分析純。
4.1矽鎂吸附劑：60~100目，sigma公司產品。
4.22.5mol/L無水乙酸鈉溶液。
4.310%木瓜蛋白酶：用2.5mol/L乙酸鈉溶液配製。使用時現配製。
4.410%澱粉酶：用2.5mol/L乙酸鈉溶液配製。使用時現配製。
4.50.1mol/L鹽酸
4.61mol/L氫氧化鈉
4.70.1mol/L氫氧化鈉
4.820%(w/v)低亞硫酸鈉溶液：此液用時現配。
4.9洗脫液：丙酮+冰醋酸+水（5+2+9）
4.100.04%溴甲酚綠指示劑
4.113%（v/v）高錳酸鉀溶液：
4.123%(v/v)過氧化氫溶液：
4.13核黃素標準液的配製：（純度>98%sigma公司）。
A)核黃素標準儲備液：（25μg/mL）將標準品核黃素粉狀結晶置於真空乾燥器或盛有硫酸的乾燥器中。經過24小時後，準確稱取50mg，置於2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5mL水。將容量瓶置於溫水中搖動，待其溶解，冷卻至室溫，稀釋至2L，移至棕色瓶中，加少許甲苯復蓋於溶液表面，於冰櫃中保存。
B)核黃素標準使用液：吸取2.00mL核黃素標準儲備液，置於50ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度。避光，貯於4℃冰櫃，可保存一周。此溶液每毫升相當於1.00μg核黃素。
5．操作步驟
整個操作過程需避光進行。
5.1樣品提取
1)水解：稱取2~10g樣品（約含10~200μg核黃素）於100ml三角瓶中，50mL0.1mol/L鹽酸，攪拌直到顆粒物分散均勻。用40ml瓷坩堝為蓋扣住瓶口，於121℃高壓水解樣品30min。水解液冷卻後，滴加1mol/L氫氧化鈉，用0.04%溴甲酚綠作外指示劑調至pH為4.5。
2)酶解
A)含有澱粉的水解液：加入3ml10%澱粉酶溶液，於37~40℃保溫約16h。
B)含高蛋白的水解液：加3ml10%木瓜蛋白酶溶液，於37~40℃約16h。
5.2過濾：上述酶解液定容至100.0ml，用乾濾紙過濾。此提取液在4℃冰櫃中可保存一周。
5.3氧化去雜質：視樣品中核黃素的含量取一定體積的樣品提取液及核黃素標準使用液（約含1~10μg核黃素）分別於20ml的帶蓋刻度試管中，加水至15ml。各管加0.5ml冰乙酸，混勻。加3%高錳酸鉀溶液0.5ml，混勻，放置2min，使氧化去雜質。滴加3%雙氧水溶液數滴，直至高錳酸鉀的顏色褪掉。劇烈振搖此管，使多餘的氧氣逸出。
5.4核黃素的吸附和洗脫
A)核黃素吸附柱：矽鎂吸附劑約1g用濕法裝入柱，占柱長1/2~2/3（約5cm）為宜（吸附柱下端用一團脫脂棉墊上），勿使柱內產生氣泡，調節流速約為60滴/min。
B)過柱與洗脫：將全部氧化後的樣液及標準液通過吸附柱後，用約20ml熱水洗去樣液中的雜質。然後用5.00ml洗脫液將樣品中核黃素洗脫並收集於一帶蓋10ml刻度試管中，再用水洗吸附柱，收集洗出之液體並定容至10ml，混勻後待測螢光。
6.測定
A)於激發光波長440nm，發射光波長525nm測量樣品管及標準管的螢光值。
B)待樣品及標準的螢光值測量後，在各管的剩餘液（約5~7ml）中加0.1ml20%低亞硫酸鈉溶液，立即混勻，在20s內測出各管的螢光值，作為各自的空白值。
7.計算
（A-B）×S100
X=×f×---
（C-D）×m1000
式中：X--樣品中含核黃素的量，mg/100g；
A--樣品管螢光值；
B--樣品管空白螢光值；
C--標準管螢光值；
D--標準管空白螢光值；
f--稀釋倍數；
m--樣品的質量，g；
S--標準管中的核黃素含量，μg；
100
----將樣品中核黃素量由μg/g折算成mg/100g的折算係數。
1000
註：1.標準曲線由0.01μg至20μg間，呈良好的線形關係，所以每次測定樣品的同時，測定與樣品含量相近的標準即可。
2．氧化去雜質，加入高錳酸鉀的量不宜過多，以避免加入雙氧水的量大，產生氣泡，影響核黃素的吸附及洗脫。
