簡介
維生素E測定就是對維生素E的測定。食物中的維生素E經皂化提取以後，將其不可皂化的部分提取到有機溶劑中。用HPLC法測定維生素E的含量。
適用範圍
高效液相色譜法
最小檢出量分別為VA：0.8ng；α-E：91.8ng；γ-E：36.6ng；δ-E：20.6ng。
儀器
（1）高壓液相色譜儀（帶紫外檢測器）
（2）六孔恆溫水浴鍋
（3）鏇轉蒸發器
（4）高純氮氣
（5）高速離心機
試劑
本實驗所用試劑皆為分析純，所用水皆為蒸餾水
4.1無水乙醇：重蒸，不含有醛類物質
檢查方法：取2ml銀氨溶液於試管中，加入少量乙醇，搖勻，再加入10%氫氧化鈉溶液，加熱，放置冷卻後，若有銀鏡反應則表示乙醇中有醛。
脫醛方法：取2g硝酸銀溶於少量水中。取4g氫氧化鈉溶於溫乙醇中。將兩者傾入1L乙醇中，振搖後，放置暗處兩天（不時搖動，促進反應），經過濾，置蒸餾瓶蒸餾，棄去初蒸出的50ml。當乙醇中：
4.210%抗壞血酸溶液（Vc）W/V臨用前配製
4.350%氫氧化鉀溶液（KOH）W/V
4.4無水乙醚重蒸，不含過氧化物
4.4.1過氧化物檢查方法：用5ml乙醚加1ml10%碘化鉀溶液，振搖1min，如有過氧化物則放出遊離碘，水層呈黃色或加4滴0.5%澱粉液，水層呈藍色。該乙醚需處理後使用。
4.4.2去除過氧化物的方法：重蒸乙醚時，瓶中放入鐵絲或鐵末少許。棄去10%初餾液和10%殘餾液。
4.5pH1-14試紙
4.6無水硫酸鈉Na2SO4
4.7甲醇色譜純或分析純重蒸後使用
4.8重蒸水蒸餾水中加入少量高錳酸鉀重蒸後使用
4.9苯並〔e〕芘標準液稱取苯並〔e〕芘（純度98%），用脫醛乙醇配製成1ml相當於5μg苯並〔e〕芘的內標溶液。
4.臨用前用紫外分光光度法標定其準確濃度。維生素E標準液α-生育酚（純度95%Sigma公司），δ-生育酚（純度95%Sigma公司），δ-生育酚（純度95%Sigma公司）。用脫醛乙醇分別溶解以上三種維生素E標準品，使其濃度大約為1ml相當於1mg。臨用前用紫外分光光度法分別標定此三種維生素E的準確濃度。
操作步驟
本實驗需避光操作
(1)樣品皂化稱取樣品於三角瓶中，加30ml無水乙醇，振搖三角瓶，使樣品分散均勻。加入5ml10%抗壞血酸和苯並〔e〕芘標準液2ml，混勻。最後加入10ml氫氧化鉀邊加邊振搖。於沸水浴上回流30min使樣品皂化完全。皂化後立即放入冰水中冷卻。
(2)樣品萃取將皂化後的樣品移入分液漏斗中，用50ml水分2次洗皂化瓶，洗液併入分液漏斗中。用100ml無水乙醚分兩次洗皂化瓶及殘渣，乙醚液併入分液漏斗中。輕輕振搖分液漏斗2min，靜置分層，棄去水層。然後每次用約100ml水將乙醚液洗至中性，約4-5次。
(3)濃縮將乙醚提取液經無水硫酸鈉（約5g）濾入150ml鏇轉蒸發瓶內，用約15ml乙醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉2次，併入蒸發瓶內，並將其接在鏇轉蒸發器上，於55℃水浴中減壓蒸餾並回收乙醚，待瓶中乙醚剩下約2ml時，取下蒸發瓶，立即用氮氣將乙醚吹乾。加入2ml乙醇溶液，充分混合，溶解提取物。將乙醇液移入塑膠離心管中，於離心機上以3000轉/min離心5分鐘。上清液供色譜分析。
(4)標準曲線的製備將維生素A和維生素E標準品配置成標準溶液（約1mg/ml），製備標準曲線前用紫外分光光度法標定其準確濃度。標準濃度的標定方法取維生素A和維生素E標準液若干微升，分別稀釋至10.00ml乙醇中，並分別按給定波長測定各維生素的吸光值。用比吸光係數計算該維生素的濃度。測定條件如下
標準比吸光係數E1%cm波長λ，nm
視黃醇1835325
α—生育酚71294
γ—生育酚92.8298
δ—生育酚91.2298
濃度計算：
X1=A/E×1/100×10.00/S×10-3
式中X1：某維生素濃度，mg/ml；
A：維生素的平均紫外吸光值；
S：加入標準的量，μL；
E：某種維生素1%比吸光係數；
10.00/S×10-3：標準液稀釋倍數。
本法採用內標兩點法進行定量。把一定量、維生素E及內標苯並〔e〕芘液混合均勻，選擇合適的靈敏度，使上述物質的各峰高約為滿量程的70%，作為高濃度點，高濃度的1/2為低濃度點（內標苯並〔e〕芘的濃度值不變），用此二種濃度的混合標準進行色譜分析。根據微處理機裝置，按說明用二點內標法進行定量。
液相色譜分析
儀器所需條件
預柱：ODS10μm，4mm×4.5cm。
分析柱：ODS5μm，4.6mm×25cm。
流動相：甲醇：水=98：2。混勻，臨用前脫氣。
紫外檢測器波長：300nm。量程0.02。
進樣量：20μL進樣定量環。
流速：1.65-1.70mL/min。
計算
X=C/m×V×100/1000
X：某種維生素的含量，mg/100g；
C：由標準曲線上查到某種維生素含量，μg/mL；
V：樣品濃縮定容體積，mL；
m：樣品質量，g；
用微處理機二點內標法進行計算時，按計算公式計算或由微機直
接給出結果。
7注意事項
在皂化過程中，應每5分鐘搖一下皂化瓶，使樣品皂化完全。
提取過程中，振搖不應太劇烈，避免溶液乳化而不易分層。
洗滌時，最初水洗輕搖，逐次振搖強度可增加。
無水硫酸鈉如有結塊，應烘乾後使用。
在鏇轉蒸發時，乙醚溶液不應蒸乾，以免被測樣品含量有損失。
用高純氮吹乾時，氮氣不能開的太大，避免樣品吹出瓶外結果偏低。
