簡介
維生素A測定就是對維生素A的測定。維生素A的化學名為視黃醇,是最早被發現的維生素。維生素A有兩種。一種是維生素A醇(retionl),是最初的維生素A形態(只存在於動物性食物中);另一種是胡蘿蔔素(carotene),在體內轉變為維生素A的預成物質(provitaminA,可從植物性及動物性食物中攝取);維生素A的計量單位是USP單位(UnitedStatesPharmocopea)、IU單位(InternationalUnits)、RE單位(RetinolEquivalents)等3種。
維生素A測定法
本法是用分光光度法測定維生素A在特定波長處的吸收度來計算其含量,以單位表示,每單位相當於全反式維生素A醋酸酯0.344μg或全反式維生素A醇0.300μg。
由於維生素A製劑中含有稀釋用油和維生素A原料藥中混有其他雜質,所測得的吸收度不是維生素A獨有的吸收。在以下規定的條件下,非維生素A物質的無關吸收所引入的誤差可以用校正公式校正,以便得到正確結果。
校正公式系採用三點法,除其中一點是在吸收峰波長處測得外,其他兩點分別在吸收峰兩側的波長處測定,因此儀器波長若不夠準確時,即會有較大誤差,故在測定前,應校正儀器波長。測定應在半暗室中儘速進行。合成維生素A和天然魚肝油中的維生素A是酯式維生素A。如供試品中干擾測定的雜質較少,能符合下列第一法測定的規定時,可直接用溶劑溶解供試品後測定;否則應按第二法,經皂化提取,除去干擾後測定。
第一法
取供試品適量,精密稱定,加環己烷溶解並定量稀釋製成每1ml中含9~15單位的溶液,照分光光度法(附錄ⅣA),測定其吸收峰的波長,並在下列各波長處測定吸收度,計算各吸收度與波長328nm處吸收度的比值和波長328nm處的E1%1cm值。
波長,nm 吸收度比值 波長,nm 吸收度比值
3000.555 3400.811
3160.907 3600.299
3281.000
如果吸收峰波長在326~329nm之間,且所測得各波長吸收度比值不超過上表中規定的±0.02,可用下式計算含量:
每1g供試品中含有的維生素A的單位=E1% 1cm(328nm)×1900
如果吸收峰波長在326~329nm之間,但所測得的各波長吸收度比值超過表中規定值的±0.02,應按下式求出校正後的吸收度,然後再計算含量。
A(校正)=3.52(2A-A-A)
如果校正吸收度與未校正吸收度相差不超過±3.0%,則不用校正吸收度,仍以未經校正的吸收度計算含量。
如果校正吸收度與未校正吸收度相差在-15%至-3%之間,則以校正吸收度計算含量。
如果校正吸收度超過未校正吸收度的-15%或+3%,或者吸收峰波長不在326~329nm之間,則供試品須按下述第二法測定。
第二法
精密稱取供試品適量(約相當於維生素A總量500單位以上,重量不多於2g),置皂化瓶中,加乙醇30ml與50%(g/g)氫氧化鉀溶液3ml,置水浴中煮沸回流30分鐘,冷卻後,自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內部,將皂化液移至分液漏斗中(分液漏斗活塞塗以甘油澱粉潤滑劑),皂化瓶用水60~100ml分數次洗滌,洗液併入分液漏斗中,用不含過氧化物的乙醚振搖提取4次,每次振搖約5分鐘,第一次60ml,以後各次40ml,合併乙醚液,用水洗滌數次,每次約100ml,洗滌應緩緩旋動,避免乳化,直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色,乙醚液用鋪有脫脂棉與無水硫酸鈉的濾器濾過,濾器用乙醚洗滌,洗液與乙醚液合併,放入250ml量瓶中,用乙醚稀釋至刻度,搖勻;精密量取適量,置蒸發皿內,在水浴上低溫蒸發至5ml後,置減壓乾燥器中,抽乾,迅速加異丙醇溶解並定量稀釋製成每1ml中含維生素A9~15單位,照分光光度法(附錄ⅣA),在300、310、325與334nm四個波長處測定吸收度,並測定吸收峰的波長。吸收峰的波長應在323~327nm之間,且300nm波長處的吸收度與325nm波長處的吸收度的比值應不超過0.73,按下式計算校正吸收度。
A(校正)=6.815A-2.555A<[310]>-4.260A
每1g供試品中含有的維生素A的單位=E1% 1cm(325nm,校正)×1830
如果校正吸收度在未校正吸收度的±3%以內,則仍以未經校正的吸收度計算含量。
如果吸收峰的波長不在323~327nm之間,或300nm波長處的吸收度與325nm波長處的吸收度的比值超過0.73,則應自上述皂化後的乙醚提取液250ml中,另精密量取適量(相當於維生素A300~400單位),減壓蒸去乙醚至約剩5ml,再在氮氣流下吹乾,立即精密加入甲醇3ml,溶解後,精密量取500μl,注入維生素D測定法(附錄ⅦK)第二法項下的淨化用色譜柱系統,準確收集含有維生素A的流出液,在氮氣流下吹乾,而後照上述方法自“迅速加異丙醇溶解”起,依法操作並計算含量。
附註
(1)甘油澱粉潤滑劑
取甘油22g,加入可溶性澱粉9g,加熱至140℃,保持30分鐘並不斷攪拌,放冷,即得。
(2)不含過氧化物的乙醚
照麻醉乙醚項下的過氧化物檢查,如不合於規定,可用5%硫代硫酸鈉溶液振搖,靜置,分取乙醚層,再用水振搖洗滌1次,重蒸,棄去首尾5%部分,餾出的乙醚再檢查過氧化物,應符合規定。
臨床意義
如每天攝取400IU以上的維生素E時,最少也要攝取1000IU的維生素A;
2、正在服用口服避孕藥時,必須要減少維生素A的用量;
3、一星期之中,三餐里含有大量的動物肝臟、胡蘿蔔、菠菜、蕃薯、香瓜時,沒有必要再補充維生素A;
4、維生素A與礦物質油切勿一起服用;
5、維生素A與維生素B、維生素D、E、鈣、磷和鋅配合使用時,能充分發揮其功效。(必須有鋅才能把貯藏在肝臟里的維生素A釋放出);
6、維生素A也能防止維生素C受到氧化。