研究方案
鼻腔沖洗(Nasalirrigation)這種治療鼻腔、鼻竇疾病的方法已經有一個世紀的歷史了，是一種低廉有效的治療鼻腔
緩衝生理鹽水疾病的方法，這種治療方法具有巨大的潛力1。由於鼻腔沖洗具有良好的療效和耐受性，受到了醫生和患者的歡迎，特別是近年來，隨著鼻竇內窺鏡的普及，鼻竇內窺鏡手術成為耳鼻喉科一種常規的手術，而鼻竇內鏡手術後，如何促進術腔黏膜早日恢復，防止術腔粘連和竇口封閉是臨床亟待解決的問題，鼻腔沖洗是減輕上述術後併發症的一個重要措施，因此國內外對鼻腔沖洗進行了深入的研究，本文試圖向大家介紹最新研究的進展。1、鼻腔沖洗的適應症鼻腔沖洗這種治療方法被廣泛的套用於鼻腔及鼻竇的各種疾病的治療中，鼻腔沖洗可套用於不同的情況，包括急慢性鼻鼻竇炎、過敏性和非過敏性鼻炎、非特定的鼻腔症狀（如鼻涕後流）、鼻中隔穿孔、鼻腔術後、鼻腔放療後等情況。同時還可套用於普通感冒2。在一些情況下還能夠減少藥物治療。它不僅僅是一種輔助治療手段，而是治療過程中的重要組成部分，這種治療方法是有效的，而且尚未被充分利用3。對於鼻腔鼻竇等術後套用鼻腔沖洗可以明顯的減輕患者黏膜水腫、痂皮形成等不良反應，降低患者求助醫生的次數4。GaravelloW等人通過研究高滲鹽水沖洗鼻腔對季節性變應性鼻炎的作用，發現高滲鹽水鼻腔沖洗能夠明顯改善患者症狀，減少口服抗組胺藥的使用。因此他建議季節性變應性鼻炎患者在花粉季節套用高滲鹽水沖洗鼻腔5。KlossekJM對鼻息肉病患者採取常規鼻竇內窺鏡手術後，在術後給予套用鼻腔沖洗及局部類固醇激素治療，取得了很好的療效，因此他認為術後鼻腔沖洗和局部類固醇激素噴鼻能夠鞏固內窺鏡手術的療效6。最近，在歐洲過敏與臨床免疫學會（EAACI）及歐洲鼻科學會關於鼻竇炎及鼻息肉的指導綱要中將鼻腔沖洗作為鼻竇炎、鼻息肉的一項重要治療措施7。２.鼻腔沖洗的作用機制鼻腔沖洗是一種簡單、經濟、有效的治療方法，能夠明顯的緩解患者鼻腔、鼻竇的症狀，同時由於減少藥物治療的用量，因此能夠降低細菌的耐藥性。但是鼻腔沖洗的確切作用及機制現在還不是很清楚，大多數人認為可能與以下機制有關，1、提高黏膜纖毛功能。2、降低黏膜水腫。3、減少炎性因子。4、物理的或機械的清除作用1。鼻腔的粘液層是機體的第一道防線，包含溶膠層和凝膠層，外來的細菌、真菌、過敏原可被粘液層俘獲。纖毛的擺動主要受凝膠層控制，纖毛朝向鼻咽部擺動使異物在鼻咽部被吞咽或吐出。因此纖毛的功能狀態與鼻腔的功能狀態息息相關3。因此大家對鼻腔沖洗對纖毛的作用做了大量的研究，大家從不同角度對不同鼻腔沖洗液對黏膜纖毛的作用進行了研究。如Boek等人在一項實驗研究中，通過分別檢測林格氏液、生理鹽水、7%和14%高滲鹽水對冷藏保存的蝶竇黏膜的纖毛擺動頻率(CBF)的影響，發現林格氏液對CBF無影響，生理鹽水輕度降低CBF，7%的高滲鹽水可導致暫時性的纖毛停滯，但14%的高滲鹽水則會導致不可逆的纖毛停滯。因此他也認為鼻腔沖洗套用林格氏液較好8。但是應當看到他所測的高滲鹽水濃度太高，而不是我們普通用的３％左右的高滲鹽水。而Talbot通過分別檢測緩衝高滲鹽水(3%,pH7.6)和緩衝生理鹽水組鼻腔沖洗前後正常人的黏膜纖毛清除率，發現緩衝高滲鹽水能夠明顯的提高黏膜纖毛清除率。他認為這是由於緩衝高滲鹽水能夠增加粘液溶膠層的厚度，降低粘液的粘稠度，從而更有利於纖毛的運動，這在病理狀態如鼻竇炎時尤為顯著，因此他建議套用緩衝的高滲鹽水溶液沖洗鼻腔9。也有研究表明PH值的變化對黏膜纖毛清除率沒有明顯的影響10。因此是否套用緩衝的鹽水尚無定論。對鼻腔沖洗作用的機制，大多是通過檢測鼻腔纖毛運動的方法來探討的，由於所測的沖洗液不同，所以結果也不相同，因此有必要對此進行系統的研究，同時應當看到對現在研究鼻腔沖洗的機制的切入點僅放到纖毛運動上，還需要放寬眼光，做更多的研究。３.安全性及耐受性鼻腔沖洗是一種安全的治療方法，副作用很少，僅有少量文獻報導有以下副作用，如鼻腔刺激、局部燒灼感、癢感、、撕裂感、鼻出血、頭痛、、耳痛及沖洗後進入鼻竇的液體流出引起的不適等副作用多等症狀，但是大部分人認為這些副作用不重要，而且也不影響患者對鼻腔沖洗的滿意度11。因此大多數患者認為鼻腔沖洗是可以耐受的。如KeerlR等通過問卷的方式詢問了134個患者，結果95%的患者認為鼻腔沖洗這種治療方法容易做到，而且84.7%的患者認為這種治療方法很舒服。因此他認為鼻腔沖洗是一種為患者所認可的治療方法12。而Rabago等通過一項隨機的臨床對照試驗發現，試驗組每天套用2%的緩衝生理鹽水沖洗鼻腔6個月後，與對照組相比較，鼻腔沖洗能夠明顯提高患者鼻竇相關的生活質量，減少患者症狀，經過治療後患者大多表示對此種治療滿意13。４.裝置和方法對於鼻腔沖洗的裝置和方法現在也沒有一個同一的意見，現在有數種裝置和方法被推薦。對此有人套用包含放射性元素鎝的生理鹽水鼻腔沖洗液分別用三種方法沖洗鼻腔，然後測定沖洗液的彌散度。一種方法是鼻腔灌洗，即患者跪地，前額著地，每次以生理鹽水由注射器滴入直至鼻腔灌滿。保持該位置2分鐘後直立。另一種方法是鼻腔噴液。第三種方法是鼻腔噴霧。他發現鼻腔灌洗方法能夠更有效地彌散到上頜竇及鼻道竇口複合體部位，因此他建議套用鼻腔灌洗的方法沖洗鼻腔。而不是採用鼻腔噴霧的方法。但是上述幾種方法都不能很好的彌散到蝶竇和額竇14。但是HeatleyDG等認為各種沖洗的方法對改善鼻竇的症狀無差別，患者可以選擇自己喜歡的方法沖洗15。５.鼻腔沖洗液鼻腔沖洗液是研究爭論最多的話題，至今沒有一個意見一致的方案，現在有數種濃度的鹽水、數種鼻腔沖洗液添加劑被推薦。其爭論焦點主要涉及以下幾個方面：5.1高滲還是等滲對鼻腔沖洗液應當是高滲還是等滲，有比較大的爭論，大多數套用的是高滲的沖洗液913，如ShoseyovD通過對照研究3.5%和0.9%兩種濃度的鹽水沖洗液，發現3.5%的鹽水沖洗液對於兒童鼻竇炎的療效優於0.9%生理鹽水組16。而David在一個隨機、對照的試驗中，將病人隨機分為兩組，治療組套用2%的緩衝高滲鹽水以一種特製的鼻腔沖洗壺沖洗鼻腔，治療前後分別給予問卷調查，結果發現套用緩衝高滲鹽水沖洗鼻腔後患者鼻塞、鼻源性頭痛等症狀發生比率降低，同時能夠套用更少的抗生素和鼻腔噴霧劑11。國內張慧敏等套用3%無菌鹽水沖洗術腔，發現其療效明顯優於生理鹽水沖洗術腔，因此認為內鏡鼻竇術後採用高滲鹽水沖洗鼻腔是一種有效的、經濟的、可行的選擇，可提高內鏡鼻竇手術的療效17。但是有很多人還是主張套用等滲的鹽水或林格氏液，對此PediatrAllergyImmunol雜誌曾因此而產生了一場爭論，首先由GaravelloW等人發表一篇文章，他建議套用高滲鹽水沖洗鼻腔18。接著DegirmenciogluH等給編輯寫信，認為高滲鹽水能夠導致組胺、P物質的釋放，以及腺體分泌的增多，從而導致患者的疼痛。同時由於高滲鹽水能夠導致黏膜上皮細胞的纖毛運動降低，因此他強烈反對套用高滲鹽水沖洗鼻腔，而推薦套用等滲的生理鹽水沖洗鼻腔19。同時有部分人認為等滲的林格氏液沖洗鼻腔較好，如UnalM通過比較套用林格氏液和生理鹽水沖洗對貓氣管上皮的纖毛清除率的影響，發現林格氏液同生理鹽水相比更能促進纖毛的運動，因此他人為套用林格氏液作為一種鼻腔沖洗液更好20。Boek等人也認為鼻腔沖洗套用林格氏液較好8。5.2緩衝液還是非緩衝液對於鼻腔沖洗液中是套用緩衝液還是非緩衝液，對此也有不同的看法，許多人套用加入小蘇打的的緩衝鹽水作為鼻腔沖洗液，如Talbot9及KeojampaBK21建議套用緩衝的3%的高滲鹽水溶液沖洗鼻腔。而Rabago13和David11則套用的是2%的緩衝高滲鹽水。但是也有研究表明PH值的變化對黏膜纖毛清除率沒有明顯的影響，因此主張不需要套用緩衝液10。5.3沖洗液的添加劑鼻腔沖洗液的添加劑國外套用最多的是抗生素，如氨基糖甙類抗生素，同時也有部分人套用抗真菌藥物沖洗，如RicchettiA等套用0.1%兩性黴素B混懸液沖洗鼻腔，發現能夠縮小鼻息肉，降低或減緩鼻息肉的復發率，因此他認為，鼻息肉的發病機制可能是由於對真菌的高反應性引起的，而二性黴素B能夠殺滅真菌，同時他還推測二性黴素B影響息肉上皮細胞膜的完整性的作用可能也是其中的原因22。國內很多地方套用的是加入慶大黴素和地塞米松的生理鹽水沖洗23。同時亦有在上述沖洗液中加入糜蛋白酶的24。國內研究最多的沖洗液為中藥沖洗液，中藥沖洗液大體可以分為兩類，即加入中成藥的沖洗液和中藥組方沖洗液。加入中成藥的沖洗液大多為清熱解毒的中成藥，如石堯機、周永套用加入魚腥草液的生理鹽水在鼻竇內窺鏡術後行鼻腔沖洗，認為功能性鼻竇內窺鏡術後用魚腥草加生理鹽水沖洗鼻腔,療效確切,用藥簡單,副作用少,費用低廉,可提高清理效率,促進術腔上皮化25。李昌林、趙宇26等宜贊成上述鼻腔沖洗液。亦有套用穿琥寧27、、鼻淵舒28及善邦通29的。中藥組方沖洗液中包含的中藥大多分為兩類，即清熱燥濕類中藥和清熱解毒類中藥。清熱燥濕類藥物以黃連、黃芩、黃芪等藥物多見，如張偉、魯文軍等套用用三黃液（由黃連、黃芩、黃芪等藥物組成）對ESS患者術腔進行沖洗,取得顯著療效30。而烏維秋、黃盛光等則套用由黃芪、黃連、黃芩、黃柏等藥物組成的四黃灌洗液沖洗鼻腔，結果發現術後鼻腔套用四黃灌洗液沖洗能加快鼻腔黏膜形態和功能的恢復，與對照組（生理鹽水+慶大黴素+地塞米松）有更好的療效31。清熱解毒類以魚腥草、薄荷、桅子等藥物為主，如曾旭東,何源萍等套用鼻腔鼻竇沖洗液（主要由黃芩、白芷、丹參、桔梗、石曹蒲、金銀花、地丁、蒲公英、乳香、沒藥等藥物組成）在內窺鏡術後沖洗鼻腔，發現中藥沖洗液在鼻內窺鏡手術後的術腔清潔、控制感染、縮小病灶、緩解水腫、儘快控制手術創面的炎性滲出及痂皮形成、減輕變態反應、防止肉芽組織增生與囊泡形成、防止粘連、加速上皮化等方面均有一定的促進作用,且無明顯不良反應，其療效明顯優於生理鹽水+地塞米松+慶大黴素32。但是對於鼻腔沖洗液中是否需要加入添加劑國外有不同意見，如Davidson認為鼻腔沖洗液的添加劑現實意義不大33。對於鼻腔沖洗國內外進行了深入的研究，但是應當看到現在關於鼻腔沖洗液、鼻腔沖洗裝置等各方面沒有一個意見一致的方案，現在有數種濃度的鹽水、數種鼻腔沖洗裝置、數種鼻腔沖洗液添加劑被推薦，有必要對其進行進一步的深入研究。用途
一種用於生物工程領域的禽霍亂凝集抗原的製備方法，本發明步驟如下：1)將禽多殺性巴氏桿菌CVCC458復甦後連續傳代接種雞胚，分離鑑定細菌作菌種；2)將菌種接種於改良馬丁肉湯培養液中，懸浮振盪培養無雜菌後，加入福馬林，振盪處理進行滅活，無菌檢驗後，將菌液用磷酸鹽緩衝液洗菌體；3)將菌體進行酸處理，用磷酸鹽緩衝液或鹽酸生理鹽水稀釋成懸液，水浴，水浴中間輕搖數次，離心棄上清，用磷酸鹽緩衝液洗菌體，以生理鹽水配成懸液；4)將上述酸處理菌體進行乙二胺四乙酸鹽處理，用生理鹽水配成懸液，即為禽霍亂凝集抗原。本發明製備的禽霍亂凝集原具有高度的特異性、敏感性和穩定性，方法簡便，適用於平板凝集、試管凝集與微量板凝集試驗。
一種禽霍亂凝集抗原的製備方法，其特徵在於，具體步驟如下：1)將禽多殺性巴氏桿菌CVCC458復甦後連續傳代接種雞胚，分離鑑定細菌；2)將菌種接種於改良馬丁肉湯培養液中，懸浮振盪培養無雜菌後，加入福馬林，振盪處理進行滅活，無菌檢驗後，將菌液用磷酸鹽緩衝液洗菌體；3)將菌體進行酸處理，用磷酸鹽緩衝液或鹽酸生理鹽水稀釋成懸液，水浴，水浴中間輕搖數次，離心棄上清，用磷酸鹽緩衝液洗菌體，以生理鹽水配成懸液；4)將上述酸處理菌體進行乙二胺四乙酸鹽處理，用生理鹽水配成懸液，即為禽霍亂凝集抗原。
