簡介
蛋白酶分類
按其水解多肽的方式，可以將其分為內肽酶和外肽酶兩類。內肽酶將蛋白質分子內部切斷，形成分子量較小的月示和腖。外肽酶從蛋白質分子的游離氨基或羧基的末端逐個將肽鍵水解，而游離出胺基酸，前者為氨基肽酶後者為羧基肽酶。按其活性中心和最適pH值，又可將蛋白酶分為絲氨酸蛋白酶、巰基蛋白酶、金屬蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反應的最適pH值，分為酸性蛋白酶、中性蛋白酶和鹼性蛋白酶。工業生產上套用的蛋白酶，主要是內肽酶。
蛋白酶廣泛存在於動物內臟、植物莖葉、果實和微生物中。微生物蛋白酶，主要由黴菌、細菌，其次由酵母、放線菌生產。
催化蛋白質水解的酶類。種類很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶等。蛋白酶對所作用的反應底物有嚴格的選擇性，一種蛋白酶僅能作用於蛋白質分子中一定的肽鍵，如胰蛋白酶催化水解鹼性胺基酸所形成的肽鍵。蛋白酶分布廣，主要存在於人和動物消化道中，在植物和微生物中含量豐富。由於動植物資源有限，工業上生產蛋白酶製劑主要利用枯草桿菌、棲土麴黴等微生物發酵製備。
內容
蛋白酶催化蛋白質水解的酶類。種類很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶等。蛋白酶對所作用的反應底物有嚴格的選擇性，一種蛋白酶僅能作用於蛋白質分子中一定的肽鍵，如胰蛋白酶催化水解鹼性胺基酸所形成的肽鍵。蛋白酶分布廣，主要存在於人和動物消化道中，在植物和微生物中含量豐富。由於動植物資源有限，工業上生產蛋白酶製劑主要利用枯草桿菌、棲土麴黴等微生物發酵製備。
作用
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為8.0、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配製胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為0.25%，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻，置於4℃內過夜。
2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超淨台內用注射濾器(0.22微米微孔濾膜)抽濾除菌。然後分裝成小瓶於-20℃保存以備使用。
胰蛋白酶能夠催化蛋白質的特定肽鍵水解，這個催化過程是不需要能量的，不會使酶失去活力，也不會改變形狀和使自身水解。底物與酶的活性中心的結合是可逆的，這種結合使得蛋白質特定肽鍵因彎曲變形而被活化，更易於受到水分子的攻擊，分別形成氨基和羧基而斷裂，得到小分子多肽或胺基酸。不同的蛋白酶可以作用在不同胺基酸相連組成的肽鍵，因此胰蛋白酶並不能作用在所有的肽鍵。
