介紹
胰酶的激活與釋放:胰蛋白酶胰蛋白酶原的分子量約為24000，其等電點約為pH8.9，胰蛋白酶的分子量與其酶原接近（23300），其等電點約為pH10.8，最適pH7.6～8.0，在pH=3時最穩定，低於此pH時，胰蛋白酶易變性，在pH>5時易自溶。Ca2+離子對胰蛋白酶有穩定作用。重金屬離子，有機磷化合物和反應物都能抑制胰蛋白酶的活性，胰臟、卵清和豆類植物的種子中都存在著蛋白酶抑制劑。最近發現在一些植物的塊基（如土豆、白薯、芋頭等）中也存在有胰蛋白酶抑制劑。胰蛋白酶能催化蛋白質的水解，對於由鹼性胺基酸（精氨酸、賴氨酸）的羧基與其他胺基酸的氨基所形成的鍵具有高度的專一性。此外還能催化由鹼性胺基酸和羧基形成的醯胺鍵或酯鍵，其高度專一性仍表現為對鹼性胺基酸一端的選擇。胰蛋白酶對這些鍵的敏感性次序為：酯鍵>醯胺鍵>肽鍵。因此可利用含有這些鍵的醯胺或酯類化合物作為底物來測定胰蛋白酶的活力。目前常用苯甲醯-L-精氨酸-對硝基苯胺（簡稱BAPA）和苯甲醯-L-精氨酸-β-萘醯胺（簡稱BANA）測定醯胺酶活力。用苯甲醯-L-精氨酸乙酯（簡稱BAEE）和對甲苯磺醯-L-精氨酸甲酯（簡稱TAME）測定酯酶活力。本實驗以BAEE為底物，用紫外吸收法測定胰蛋白酶活力。酶活力單位的規定常因底物及測定方法而異。從動物胰臟中提取胰蛋白酶時，一般是用稀酸溶液將胰腺細胞中含有的酶原提取出來，然後再根據等電點沉澱的原理，調節pH以沉澱除去大量的酸性雜蛋白以及非蛋白雜質，再以硫酸銨分級鹽析將胰蛋白酶原等（包括大量的酸性雜蛋白以及非蛋白雜質，再以硫酸銨分級鹽析將胰蛋白酶原等（包括大量糜蛋白酶原和彈性蛋白酶原）沉澱析出。經溶解後，以極少量活性胰蛋白酶激活，使其酶原轉變為有活性的胰蛋白酶（糜蛋白酶和彈性蛋白酶同時也被激活），被激活的酶溶液再以鹽析分級的方法除去糜蛋白酶及彈性蛋白酶等組分。收集含胰蛋白酶的級分，並用結晶法進一步分離純化。一般經過2～3次結晶後，可獲得相當純的胰蛋白酶，其比活力可達到8000～10000BAEE單位/毫克蛋白，或更高。
產品說明
胰蛋白酶【性狀】本品為白色或類白色結晶性粉末。
【功能與主治】①臨床用於治療膿胸、血胸、外科炎症、潰瘍、創傷性損傷等②亦可噴霧吸入溶解粘痰③過去用本品傷口浸潤封閉治療蛇咬傷。
【別名】結晶胰蛋白酶（Crystalline Trypsin）。
【製劑/規格】注射粉劑：1000U、2000U、5000U、10000U。
【類別】蛋白分解酶。
【不良反應】①本品肌肉注射或腔穴滴注有時會產生過敏反應，出現寒戰、發熱、呼吸促、心跳快等。②粉末敷撒創面有燒痛感。③肌肉注射有疼痛感，有時注射部位可出現硬結。
【生產企業】廣東天普生化醫藥股份有限公司、甘肅金盛生化製藥有限公司、杭州三葉生物化工廠、廣州天普生物化學製藥有限公司、上海復旦張江生物醫藥有限公司、上海生物化學製藥廠
作用與用途
本品為蛋白質水解酶，能選擇地水解蛋白質中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構成的肽鏈，能消化溶解變性蛋質，對未變性的蛋白質無作用，因此，能使膿、痰液、血凝塊等分解、變稀，易於引流排除，加速創面淨化，促進肉芽組織新生，此外還有抗炎症作用。臨床上用於膿胸、血胸、外科炎症、潰瘍、創傷性損傷、瘺管等所產生的局部水腫、血腫及膿腫等。噴霧吸入，用於呼吸道疾病。也可用於治療毒蛇咬傷。還常用於動物細胞培養前對組織的處理。
劑量與用法
肌內注射，1000～2000U或5000U用生理鹽水或注射用水溶解，1次/日。治毒蛇咬傷，取本品2000U，1～3支，加0.25%～0.5%鹽酸普魯卡因液(或注射用水)4ml～20ml溶解，以牙痕為中心，在傷口周圍作浸潤注射。或在腫脹部位上方作環形封閉1～2次，如病情需要可重複使用。
副作用
1寒戰、發熱、頭痛、頭暈、胸痛及腹痛、腹瀉等。2不可用於急性炎症及出血空腔中。3肝、腎損傷、血凝異常和有出血傾向者忌用。
作用機理
胰蛋白酶是胰腺的外分泌部分泌的,在小腸里對蛋白質消化有無法替代的作用,在動物細胞培養中可用於分散組織中的細胞以及使貼壁生長的細胞脫落。但在學習過程中,許多人會擔心胰蛋白酶是否會對細胞蛋白質造成破壞?是否會分解小腸里其他的消化酶?下面來看看這些擔心的情況會不會發生。成人每日分泌約1~2L胰液。胰液中主要有胰澱粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶原和糜蛋白酶原。當胰液進入十二指腸後,胰蛋白酶原被膽汁和腸液中的腸致活酶激活成為具有活性的胰蛋白酶。酸和胰蛋白酶也能使胰蛋白酶原活化。
糜蛋白酶原則由胰蛋白酶激活為糜蛋白酶。胰蛋白酶和糜蛋白酶都能分解蛋白質,兩者共同作用時,可使蛋白質分解為小分子的多肽和胺基酸。胰蛋白酶能選擇性地水解蛋白質中賴氨酸或精氨酸的羧基端肽鍵,能消化溶解變性蛋白質,對未變性的蛋白質無作用,因此,對活細胞的蛋白質以及有活性的消化酶不起作用。在正常情況下,胰腺細胞內的胰蛋白酶原無活性,但在病變的情況下胰腺組織受胰蛋白酶的自身消化作用。胰腺炎時,因某些因素會激活胰蛋白酶,後者又激活了其他酶反應,對胰腺發生自身消化作用,促進了其壞死溶解。
細胞培養
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為8.0、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配製胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為0.25%，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。攪拌混勻，置於4℃內過夜。
2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超淨台內用注射濾器（0.22微米微孔濾膜）抽濾除菌。
3.然後分裝成小瓶於-20℃保存以備使用。
