核酸分子雜交技術
其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按鹼基互補原成雙鏈。雜交的雙方是待測核酸序列及探針(probe),待測核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因組DNA和細胞總RNA。核酸探針是指用放射性核素、生物素或其他活性物質標記的,能與特定的核酸序列發生特異性互補的已知DNA或RNA片段。根據其來源和性質可分為cDNA探針、基因組探針、寡核苷酸探針、RNA探針等。
核酸分子雜交技術主要有以下幾種:
Southern雜交Northern雜交原位雜交(ISH)螢光原位雜交(FISH),晶片雜交(屬於固一液相雜交)每一種雜交技術都有其特點,因探針的選擇不同又可以衍生出許多相關的技術,在不同領域發揮著重要作用。
特點:
(1)靈敏度高、特異性強;
(2)用於DNADNA和RNARNA的定性、定量檢測。
用途:
(1)檢測特異DNADNA序列的拷貝數、特定DNADNA區域的限制性內切酶圖譜,判定基因的缺失、插入、重排現象;
(2)特異基因克隆的篩選;
(3)核酸序列的初略分析;
(4)PCR技術的分子基礎。