用途
大腸菌群是指在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。它是評價食品衛生質量的重要指標之一,目前已被廣泛套用於食品衛生檢驗工作中。
大腸菌群多存在於溫血動物糞便、人類經常活動的場所以及有糞便污染的地方,大腸菌群數的高低,表明了食品及食品生產過程中受污染的程度。目前大腸菌群的檢測的傳統方法主要包括GB4789.3-2008,SN/T1896-2007,SN/T0169-2010等。
Petrifilm是美國3M公司發明的一種進行菌落計數的乾膜,有操作簡單,檢測周期短等優點,它一旦投入使用,將大大縮短檢測周期,簡化實驗操作並取得較大的經濟收益。
原理
Petrifilm大腸菌群測試片採用可再生的水合物乾膜,由上下兩層薄膜組成。上層聚丙烯薄膜含有粘合劑、指示劑及冷水可溶性凝膠;下層聚乙烯薄膜含有大腸菌群生長所需的VRB培養基。大腸菌群在發育時產生琥珀酸脫氫酶,將上層薄膜中的指示劑還原成紅色非溶解性三苯甲,從而使細菌著色,另,測試片表面覆蓋的薄膜可留住發酵乳糖的大腸菌群產生的氣體。故測試片上紅色菌落周圍有氣泡者,為大腸菌群。
樣品處理
取樣品25mL(g)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質杯內,製成1:10的樣品勻液,用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內,振搖後成為1:100的稀釋液。
接種
一般食品選1~2個稀釋度進行檢測,含菌量少的液體樣品(如飲用純水和礦泉水等)可直接吸取原液進行檢測。將大腸菌群測試片置於平坦實驗台面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液垂直滴加到測試片中央處,然後再將上層膜緩慢蓋下,避免產生氣泡。使用壓板(平面底朝下)放置在上層模中央處。輕輕的壓下,使樣液均勻覆蓋於圓形的培養面積上,切勿扭轉壓板。拿起壓板,靜置至少1min使培養基凝固。
培養
測試片的透明面朝上置於恆溫培養箱內,堆疊片數不超過20片。培養溫度為36℃±1℃,培養24±2h。
結果判讀
培養後大腸菌群在測試片上顯紅色,可目視、用菌落計數器、放大鏡或Petrifilm自動判讀儀計數,並可參考判讀手冊計數菌落數。