原理
生物中含有一定量的目的蛋白。先從生物細胞中提取總蛋白或目的蛋白，將蛋白質樣品溶解於含有去污劑和還原劑的溶液中，竟SDS-PAGE電泳將蛋白質按分子量大小分離，再把分離的各蛋白質條帶原位轉移到固相膜（硝酸纖維素膜或尼龍膜）上，接著將膜浸泡在高濃度的蛋白質溶液中溫育，以封閉其非特異性位點。然後加入特異抗性體（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）與一抗結合後，再加入能與一抗專一性結合的帶標記的二抗（通常一抗用兔來源的抗體時，二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗體），最後通過二抗上帶標記化合物（一般為辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶）的特異性反應進行檢測。根據檢測結果，從而可得知被檢生物（植物）細胞內目的蛋白的表達與否、表達量及分子量等情況。Western雜交方法靈敏度高，通常可從植物總蛋白中檢測出50ng的特異性的目的蛋白。
試劑配製
(1)轉移電泳緩衝液：20mmol/LTrisHCLpH8.0；150mmol/L甘氨酸；加14.5gTris粉67.08g甘氨酸於4L水中，加入1200mL；甲醇，加水至6L
(2)麗春紅S溶液：0.5%麗春紅S；1%乙酸
操作步驟
(1)用已製備好的SDS-PAGE分離的蛋白凝膠。
(2)用一張濾紙，剪成與膠同樣大小，在轉移電泳緩衝液中預濕，放在Scotch-BritPad上，在膠的陰性端放上濾紙，膠的表面用該緩衝液浸濕，排出所有氣泡。
(3)在膠的陽極面放置同樣大小浸濕的硝酸纖維素膜，排出氣泡，再在濾膜的陽極端放置一張濾紙，排出氣泡，再放一個Scotch-BritPad。
(4)將以上“三明治”樣裝置放入一個塑膠支撐物中間，將支撐物放入電轉移裝置中，加入電轉移緩衝液。
(5)接通電源：使膠上的蛋白轉移到硝酸纖維素膜上，電壓為14V4℃轉移4小時或過夜。
(6)將濾膜放入麗春紅S溶液中5分鐘，蛋白染色水中脫色2分鐘，照像，用印度墨水將分子量標準染色，在水中完全脫色。
(7)將濾膜放在塑膠袋中，每3張加入5mL封閉緩衝液(1克速溶去脂奶粉溶於100mlPBS中)，封閉特異性抗體結合位點，室溫1h，搖動，倒出封閉緩衝液。
(8)在封閉緩衝液中稀釋第一抗體，加入後室溫放置1小時，將濾膜轉到塑膠盒中，用200mLPBS洗四次，搖動。(9)在封閉緩衝液中稀釋辣根過氧化物酶標記的二抗，重複步驟8。
(10)將濾膜放在100mL新配製的DAB底物溶液中，大約2～3分鐘就可顯色，用水沖洗終止反應、照像。
結果分析
分析陽性(顯色)條帶的分子量大小，而且根據信號(顏色)強弱分析蛋白表達量。
