革蘭氏染色劑
簡介
革蘭氏染色劑不僅用來觀察細菌的形態，而且它還是細菌鑑定的重要方法，它可將全部細菌區分別革蘭氏陽性菌和陰性菌兩大類。革蘭氏染色法的步驟為：塗片→固定→結晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脫色→番紅復染→水洗→乾燥→觀察。
塗片與單染色法相同。
固定與單染色法相同。
結晶紫染色染色1分鐘，然後水洗並用吸水紙吸乾。
碘液媒染染色1分鐘，然後水洗並吸乾。
酒精脫色用95%酒精脫色，直到酒精不出現紫色時即停止（大約半分鐘），然後立即水洗，並吸乾。
番紅復染染色3分鐘左右，然後水洗並吸乾。
鏡檢在顯微鏡油鏡頭下觀察，菌體顯藍紫色的為革蘭氏陽性菌；菌體顯紅色的為革蘭氏陰性菌。
相關資料
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創立
細菌先經鹼性染料結晶染色，而經碘液媒染後，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），後者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀察方便，脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺鏇體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。
[原理]：革蘭氏染色目前有三種觀點：等電點學說、化學學說和滲透學說。
1．等電點學說，革蘭氏陽性菌的等電點在PH2-3，比陰性菌（PH4-5）低，加之碘為弱氧化劑，可降低革蘭氏陽性菌的等電點，致使兩類菌的等電點差異擴大，因此陽性菌和鹼性染料的結合力比陰性菌更強。
2．化學學說，碘液在菌體內與結晶紫結合後又和菌體核心糖核酸鎂鹽-蛋白質複合物結合，此結合物不易被丙酮酒精脫掉，呈革蘭氏染色陽性。因革蘭氏陰性菌缺乏核糖核酸鎂鹽，故對碘與結晶紫結合物攝取少，且不牢固，易被丙酮酒精脫色而呈革蘭氏染色陰性。
3．滲透學說，乙醇使陽性菌所含粘肽多糖脫水而致細胞壁間隙縮小，通透性降低，在菌體內保留了染料-碘複合物，呈紫色。陰性菌含粘肽少，細胞壁變化不大，通透性不受影響，菌體內的染料-碘複合物較易透出，失去紫色，被復染成為紅色。
