定義
內源尿氮( endogenous urinay nitrogen)動物基礎代謝(或飼餵無氮日糧)時由尿液排出的氮,是體內蛋白質代謝處於最低限度時的尿氮,主要是尿素、尿酸和由肌酸分解而來的肌酐等中的氮。這部分氮和其所含能量不屬於未被利用的飼料養分,在測定飼料的真代謝能和蛋白質利用率時應扣除。為機體不攝入蛋白質時尿中所含的氮,它主要來自組織蛋白的分解。
定量表示
第一,以絕食代謝為基礎表示的內源尿氮排泄量。對鼠、豬等反覆實驗證明,平均每日每千焦耳絕食代謝的能量,排泄內源尿氮約0.5mg,或每日每千克代謝體重(W0.75)排泄內源尿氮150mg。
第二,用回歸模型表示。研究發現,EUN排泄量與動物維持能量需要具有類似規律,特別是生長動物,僅用簡單的定量表示方法難於普遍適用。用回歸表示可更接近EUN的實際排泄量,例如肉牛的EUN排泄量,用下式估計:
EUN(g/日)=5.9206·logW0.76 W——體重(kg)
蛋白質的生物學價值(biological value,BV)是以氮的攝入與排出的比較為基礎,反映蛋白質經體內消化吸收後,被機體利用的程度,蛋白質生物價的值越大,則該蛋白質利用率越高。
氮儲留量=氮吸收量-(尿氮-尿內源氮);氮吸收量=攝入氮-(糞氮-糞代謝氮);即:
蛋白質生物價=氮儲留量/氮吸收量*100%
測定
1 試劑與儀器
1.1 試劑 10%CuSO4;濃H2SO4;2%EDTA;1%NaOH:鹼性碘化汞鉀;硫酸銨標準溶液
(0.1mg/ml)
1.2 儀器 UV- 754型分光光度計
2 原理
樣品經濃H2SO4消化後,尿中的氮轉化為硫酸銨存在於消化液中。在鹼性條件下,NH+4能與鹼性碘化汞鉀生成黃色化合物,顏色深淺與尿氮含量成正比,可與標準比較定量
3 操作方法
3.1 樣品處理
準確吸取5ml尿樣於100ml凱氏燒瓶中,加入2ml 10%CuSO4,10ml濃H2SO4,加熱消化至淡藍色透明,再加熱1h,冷卻,以無氨水定容至1000ml。
3.2 樣品測定
吸取消化液1ml於25ml比色管中,加少量水,加入1ml 1%NaOH,1ml 2%EDTA,5ml鹼性碘化汞鉀,用無氨水定容至25ml,混勻,以空白調零,于波長430nm處比色。
3.3 標準曲線製作
準確吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml硫酸銨標準溶液於25ml比色管中,加少量水和1%CuSO4溶液1ml,加入1ml 1%NaOH溶液,以下操作同樣品測定。
4 結果分析
4.1 最大吸收峰
取0.5ml硫酸銨標準溶液按上述操作于波長400~ 700nm掃描,得最大吸收峰為430nm
4.2 加入NaOH對測定結果的影響
吸取0.5ml硫酸銨標準溶液8份,分成2組,每組4份。第一組按下述操作,各加少量水,加1:1硫酸0.5ml,加鹼性碘化汞鉀5ml,測吸光值。第二組各加少量水,加1ml1%NaOH,加鹼性碘化汞鉀5ml,測吸光值。
4.3 EDTA用量
吸取樣品處理液1ml,按上述操作加入0~ 2.0ml 2%EDTA溶液。結果加入1ml EDTA溶液獲得最大吸收峰。
4.4 線性範圍
取硫酸銨標準溶液按上述操作。結果在13~ 81ug範圍內線性相關(r= 0.9986)。
4.5 回收率
取8份樣品,按上述操作得回收率為95.63%- 98.25%。
4.6 對比
用本法和凱氏定氮法對某一尿樣同時進行平行測定,結果本法變異係數為4.77%,而凱氏定氮法為5.06%。經t檢驗,t值為0.49< t0.05(2.101)兩種方法差異不顯著。標準差亦小於凱氏定氮法。