一種不含金屬的卟啉，c32H32n4（cooh）2，與鐵結合形成血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素和其它含鐵蛋白質的血紅素，卟啉症卟啉代謝異常的幾種病態的一種，這種病通常為遺傳性的，其特徵是血液和尿中出現大量的卟啉
原卟啉區材料
原卟啉鈉（NAPP），本實驗室提取，純度94.1%；拉米夫定葛蘭素史克製藥（蘇州）有限公司生產，批准文號：國藥準字H20030581。試劑缺口翻譯平移試劑盒購自美國 Promega CO公司；α-32P- dCTP 購自北京市亞輝生物醫學工程公司；NC膜購自Amersham公司；DHBV質粒由廣州中醫藥大學熱帶病研究所病毒室保存；Sephadex G-50購自Pharmacia公司； MEM乾粉、胎牛血清購自GIBCO公司； HBsAg，HBeAg 抗原檢測試劑盒購自上海科華生物工程公司；MTT檢測試劑盒購自北京碧雲天公司；PCR試劑盒購自華美生物工程公司。HepG 2.2.15 細胞 引自上海復旦大學醫學院分子病毒實驗室。
方法
體內實驗:動物的分組及給藥方法1日齡龍巖麻鴨購回後餵養2 d後，自脛靜脈取血，離心，收集血清，用斑點雜交的方法檢測DHBV-DNA，第13天出結果，篩選出先天自然感染鴨後進行下一步實驗。將DHBV-DNA陽性鴨隨機分為3組：模型組、拉米夫定組和NAPP組，每組8隻。NAPP組和拉米夫定組每天按20 mg/（kg·d）劑量口服給藥，模型組以生理鹽水代替藥物，連續給藥10 d。分別於給藥前、給藥後5 d、給藥後10 d及停藥後第3
天採集血樣，分離血清，-70℃凍存待檢。鴨血清DHBV-DNA的檢測 採用 DHBV-DNA Dot Blot法測定［2］。取上述鴨血清，每批同時點膜，測定鴨血清中DHBV-DNA水平，觀察其動態變化。按缺口翻譯試劑盒說明書方法，用32P標記DHBV-DNA探針，將40 μl血清點於硝酸纖維膜上，然後雜交，放射自顯影，在酶標檢測儀上測定OD值（濾光片波長為490 nm）。 體外實驗:細胞毒性檢測根據Mosmann等建立的四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法（MTT法）檢測藥物細胞毒性。具體方法：用胰酶消化HepG 2.2.15細胞後，調整細胞濃度至2×104 cell/ml，加入96孔培養板中，每孔100 μl，每個濃度設3孔，培養24 d，吸去上清後加入含有不同濃度藥物（1 ，10-1，10-2，10-3，10-4 mg/ml）的DMEM培養基。作用72 d之後，各孔中加入10 μl的MTT並繼續培養4 h，去上清，每孔加入100 μl DMSO，輕輕振盪使甲臢溶解，測570 nm波長下吸光度的OD值。計算細胞存活率和各種藥物的半數毒性濃度TC50，TC50是實驗組存活細胞為對照組的50%時的藥物濃度。細胞存活率（%）=［（OD實驗孔－OD空白對照）／（OD細胞對照－OD空白對照）］×100%，TC50= antilog［ B + (50-<50%破壞百分率) ×C / （>50%破壞百分率-<50%破壞百分率）］C = A - B，A = log>50%藥物濃度 B = log <50%藥物濃度2.2.2 藥物對細胞分泌的HBsAg、HBeAg抑制作用 HepG 2.2.1 5細胞胰酶消化後，接種於24孔培養板，每孔1 ml，培養4 d後換用含藥培養液，並設拉米夫定為陽性對照組。根據藥物毒性實驗結果，確定藥物的濃度，每濃度加3孔，同時設不加藥細胞對照3孔及培養液空白對照3孔，並於第3，6天更換新鮮的含藥液培養，第9天收集各孔細胞上清液，-20℃冷凍。採用ELISA法檢測上清液中HBsAg，HBeAg。藥物對抗原的抑制百分率（%）=［（OD細胞對照－OD實驗孔）／（OD細胞對照－OD空白對照）］×100%，IC50為HBsAg，HBeAg抑制率為50%時的藥物濃度。治療指數TI=TC50/IC50。 統計學處理 F分析配對t檢驗 採用SPSS11.5軟體包進行統計分析。
結果
體內實驗各實驗組用藥後不同時間光密度值與同組給藥前光密度值的比較。NAPP組在給藥後第5天鴨血清DHBV-DNA水平有較明顯下降，與給藥前自身比較，差異有顯著性(P<0.05)，第10天與給藥前自身比較，差異有顯著性意義(P<0.01)。拉米夫定組在給藥後第5天DHBV-DNA水平明顯下降，與給藥前自身比較，差異有顯著性意義(P<0.01)。表1 NAPP對鴨B肝模型血清病毒滴度的抑制作用(略)體外實驗NAPP對HepG 2.2.15細胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用見表2～3。由表2可知，NAPP和拉米夫定的各濃度組與細胞對照組相比HBsAg，HBeAg的OD值差異均有顯著性（P<0.05）。NAPP的各劑量組之間HBsAg，HBeAg的OD值差異有顯著性（P<0.05）。NAPP組各濃度與拉米夫定組各濃度相比，對 HBsAg，HBeAg抑制差異無顯著性（P>0.05）。表2 藥物對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg，HBeAg的抑制作用(略)表3 NAPP和拉米夫定對HBsAg，HBeAg 的治療指數藥物TC50(略)用TI來評價NAPP的抗HBV效果。當TI>2時，受試藥物高效低毒，TI越大，則表明該藥對HBV的抑制作用越強，細胞毒越小［3］。由表3可知， NAPP對HBsAg，HBeAg的治療指數分別大於188.7和64.5，提示對HBsAg，HBeAg的分泌均有抑制作用且毒性低。
