切口平移

切口平移（nick translation）是切口產生3‘羥基和5’磷酸基團，DNA延伸合成3‘端，5’端被小片段降解，缺口位點沿著雙鏈向3‘端移動，是在體外向DNA分子引入放射性標記核苷酸的技術。

基本信息

• 中文名：切口平移

• 類別：生物學術語
• 缺點：放射物質攝入率較低
• 相關：切口平移法

簡介

切口平移

切口平移法的缺點：

1.放射物質攝入率較低；

2.長時間反應後在DNAPolI的外切酶活性的作用下，將已經摻入的放射性物質游離下來，降低了攝入率；

3.必須有高純度的模板DNA；

4.反應後必須除去未反應的放射性dNTP。

操作步驟

1、用DNaseI處理雙鏈DNA，使之隨機產生單鏈斷裂。

2、DNA聚合酶I的5‘-3’外切酶活性從斷裂處5‘除去一個核苷酸，同時5‘-3'聚合酶活性將一個放射性核素標記的單核苷酸引入到斷裂的3'端。

3、反應重複進行，結果標記的核苷酸代替了原來的核苷酸殘基，形成了放射性的DNA分子。