凝乳酶原

4)進行凝乳酶原變性、復性的研究。 2)經過凝乳酶原摺疊規律及變性、復性條件的研究,復性率達40%左右。 2)凝乳酶原的復性率為40%。

酶的無活性前體,通常在有限制的水解作用後轉變成為具有活性的酶。比較著名的例子是消化酶的酶原(胃蛋白酶原,胰蛋白酶原,胰凝乳蛋白酶原)和血液凝固酶的酶原(凝血酶原,纖溶酶原)。酶原可以貯存在其合成部位而沒有引起細胞或組織自我消化(水解)的危險,待細胞需要時再被激活。

簡介

凝乳酶是生產乾酪不可缺少的製劑,其產值占整個酶製劑總產值的15.5%。主要來源是未斷奶小牛胃黏膜,故來源有限,國際市場一直供不應求,基因工程為解決此矛盾開闢了理想的途徑。二十世紀80年代以來,全世界有十多個國家相繼開展研究。在1990年由美國FDA批准Pfizer公司用大腸桿菌生產重組凝乳酶。本實驗室經過近十年工作已獲得如下成果。簡述如下:1)從牛胃得到了牛凝乳酶原cDNA。2)構建了含PrPL表達質粒,不須要價格昂貴的IPTG誘導,大大降低生產成本。3)通過凝乳酶原基因在大腸桿菌中表達調控的研究,證明核糖體結合部位的二級結構對凝乳酶原的表達起關鍵性作用,並指出二級結合部位的二級結構對凝乳酶原的表達起關鍵性作用,並指出二級結構預測能否具有指導作用,取決於恰當地確定核糖體結合部位的範圍。在此基礎上構建了高效表達質粒。4)進行凝乳酶原變性、復性的研究。復性率不僅決定於復性條件,也決定於變性條件。5)進行了小罐發酵和變性、復性放大試驗。1.主要技術指標1)通過凝乳酶原基因表達調控的研究,使凝乳酶原在搖瓶中表達產物占細胞總蛋白的35-40%。2)經過凝乳酶原摺疊規律及變性、復性條件的研究,復性率達40%左右。3)進行了(2.5-6.6L罐)小罐發酵和變性、復性放大試驗。在最佳化的發酵條件下,經過7小時左右菌體光密度達到50左右。表達水平為25%左右,每升發酵醪液可得850毫克有活性的凝乳酶。2.國內外同類技術水平1)凝乳酶原在搖瓶中的表達為菌體總蛋白的35-40%。2)凝乳酶原的復性率為40%。

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