簡介
CHO細胞是中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),1957年美國科羅拉多大學Dr. Theodore T. Puck從一成年雌性倉鼠卵巢分離獲得,為上皮貼壁型細胞。
研發歷程
微載體細胞培養開始於19世紀60年代末期,最早使用離子交換凝膠(DEAE-Sephadex A50)作為載體,輕微攪動即可懸浮在培養基中。由於這種微載體帶有電荷,利於細胞貼附於載體上進行生長繁殖。載體處於懸浮狀態時,這樣既可大大增加細胞附著面積,又使細胞能與培養基充分接觸,進而有利於細胞的生長,因此能達到大量培養細胞的目的。後來根據細胞附著生長的特點,對微載體進行改良,使其電荷或其介質更利於細胞附著和生長。培養液中大量的微載體為細胞提供了極大的附著表面,1g微載體其比表面積可達6000 cm2,從而可實現細胞的高密度培養。
高密度培養
將CHO細胞在無血清培養基(SAF-CHO-G-004)中進行無血清馴化。其次將CHO細胞(成功用無血清馴化後的細胞)用0.25%胰酶消化製成細胞懸液後,沿導流管加入含明膠微載體和SAF-CHO-G-004細胞培養基的WhcltonBioster瓶罐中連續培養生成一定量的種子細胞。最後將種子細胞進行大規模培養。運用半連續式培養來操作:在細胞增長和產物形成過程中,每間隔一段時間,從中取出部分培養物,再用新的培養液補足到原有體積,使反應器內的總體積不變。最後在細胞培養過程中進行細胞常數的檢查和培養基內污染物的檢測一些抗凋亡策略來增加細胞培養的效率。