原理
油脂受到光、熱、空氣中氧的作用,發生酸敗反應,分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產物的一種,它能與TBA(硫代巴比妥酸)作用生成粉紅色化合物,在532nm波長處有吸收高峰,利用此性質即能測出丙二醛含量,從而推導出油脂酸敗的程度。
試劑
氯仿(分析純)、三氯乙酸混合液(準確稱取分析純三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA,用水溶解,稀釋至100ml)、0.02mol/L硫代巴比妥酸(TBA)溶液(準確稱取TBA0.288g溶於水中,並稀釋至100ml,如TBA不易溶解,可加熱至全溶澄清,然後稀釋至100ml),丙二醛標準溶液(稱取0.315g 1,3,3-四乙氧基丙烷,溶解後稀釋至1000ml,此溶液每ml相當於丙二醛100ug,置於冰櫃內保存。準備吸取10ml,稀釋至100ml,此溶液每ml相當於丙二醛10ug,備用) 。
實驗步驟
(1)標準曲線的繪製
準確吸取每相當於丙二醛10ug的標準溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6置於10ml納氏比色管中,加水至總體積5ml,加入5mlTBA溶液,然後按樣品測定步驟進行,測得光密度繪製標準曲線。
(2)樣品測定
準確稱取融化均勻的油脂樣品3-10g,置於150ml有蓋三角瓶內,準確加入50.00ml三氯乙酸混合液,在70℃水浴上振搖半小時,趁熱用雙層濾紙過濾兩次,除去油脂。準確稱取上述濾液5.00ml置於10ml比色管內,加入5.00mlTBA溶液,混勻,加塞,置於90℃水浴內保溫40min,取出,室溫冷卻1h,搖勻,靜置2min,於532nm波長對照標準曲線得到微克數(同時作空白試驗)。
(3)丙二醛含量(mg/kg)=(C*50)/(m*50)
式中:C-從標準查得丙二醛的微克數,ug;m-樣品質量,g。丙二醛一般適用於動物油脂 。
注意事項
(1)水浴震盪時要在水浴振盪器上進行,不要先在水浴鍋中保溫30min再用手震盪30min。
(2)要用雙層濾紙過濾兩遍,否則濾液中可以殘留部分油脂,影響檢測結果。