Schiff氏試劑

Schiff 試劑,中文全稱為:品紅醛試劑,主要用於生物學實驗中鑑定DNA的存在。 Schiff 試劑是由鹼性品紅和亞硫酸鈉配製而成。可以和醛基反應形成紫紅色的溶液。在生物實驗可以和經過酸化的DNA 發生反應,DNA 被染成紫紅色,而不和核仁,細胞質發生反應,因此可以來鑑定DNA的存在。

配製及保存方法

稱取0.5g鹼性品紅加入到100ml煮沸的蒸餾水中(用三角瓶),時時振盪,繼續煮5min(勿使之沸騰),充分溶解。然後冷卻致50℃時用濾紙過濾,濾液中加入10ml1mol/LHCl,冷卻致25℃時,加入0.5g偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)或偏重亞硫酸鉀(K2S2O5),充分振盪後,塞緊瓶塞,在室溫暗處靜置至少24h(有時需要2至3天),待溶液紅色褪去,呈現無色或淡黃,然後加入0.5g活性碳,用力振盪一分鐘,最後用粗濾紙過濾於棕色瓶中,封瓶塞,外包黑紙。濾液應為無色也無沉澱,貯於冷暗處(如4℃冰櫃中)備用,可保持數月或更長時間。如有白色沉澱,就不能再使用,如顏色變紅,可加入少許偏生亞硫酸鈉或鉀,使之再轉變為無色時,仍可再用。

注意事項

schiff試劑染色DNA時需在避光條件下進行。與shiff試劑反應的DNA,必須是被解離過的,因為顯色原理是DNA中醛基與無色品紅結合得到,而完整雙鏈DNA也無醛基的,只有被水解後鹼基與脫氧核糖之間的鍵打開,才會在脫氧核糖上形成游離醛基。因此schiff常與過碘酸試機合用,過碘酸用以把脫核糖和糖類的羥基氧化成醛基,從而使得schiff鹼得以與之結合,這正是PAS染色的基本原理。

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