定義
Schiff 反應:細胞中的醛基可使Schiff 試劑中的無色品紅變為紅色。這種反應通常用於顯示糖和脫氧核糖核酸(Feulgen 反應)
原理
為廣泛套用的病理組織染色反應。其顯示糖元的原理,是含有乙二醇基的糖類,在過碘酸的作用下,氧化而產生醛基,醛基與雪夫氏液作用,使無色復紅變成紫紅色染料而使糖元顯示出來,這種反應稱為過碘酸雪夫氏(Periodic acid Schiff)反應,簡稱PAS反應。
鹼性復紅是含有醌基的染料,加亞硫酸或二氧化硫後,將酯基結構破壞,則失去顏色,成為無色復紅液,即雪夫氏(Schiff)液。
試劑及操作步驟
1%過碘酸液。
N鹽酸:比重1.19的濃鹽酸82ml,加蒸餾水至1,000ml;或用比重1.16的鹽酸98.3ml,加蒸餾水至1,000ml。
雪夫氏(Schiff)液:配製方法如下。 (1)取300ml容量的三角燒瓶一個,裝入蒸餾水200ml,加熱煮沸。 (2)去火後,加入鹼性復紅1g(在煮沸過程中加復紅易噴出),振盪5min。 (3)冷至50℃,濾過,加入1M鹽酸20ml。 (4)冷至25~30℃,加入偏重亞硫酸鈉(NaSO)4~5g,搖勻,此時產生大量氣體,應把瓶蓋緊,讓氣體充分與復紅作用、然後置於暗處過夜,液體變成淡紅色或淡黃色,配製質量好的接近無色,若
紅色不褪說明配製過程有問題或藥劑不純。配液不能使用。 (5)加活性炭1~2g,振搖1min,靜止30min,濾過,以液體完全無色為佳。 (6)裝入褐色瓶內,在冰櫃中保存。用時取出,等液溫升至室溫(18~22℃)時方可使用。如果液體又變紅,則不能使用。
偏重亞硫酸鈉液: 0.5263mol/L偏重亞硫酸鈉液 7.5ml 1M鹽酸 7.5ml 蒸餾水 130ml 此液不能久存,每次應現用現配。
梅野氏蘇木素液。 操作
(1)切片脫蠟、速浸水(在水中時間過久,糖元即溶解)。
(2)入1%過碘酸液氧化5~10min。 (3)常水沖洗5min,再用蒸餾水洗短時。 (4)入雪夫氏液10~15min(可將雪夫氏液滴於切片上)。 (5)傾去染片上的雪夫氏液,然後順次通過三瓶偏重亞硫酸鈉液,在每瓶中約停留1~2min。 (6)常水沖洗,入梅野氏蘇木素液染3~5min,常水洗至核呈藍色。
(7)入各級酒精脫水,二甲苯透明,香膠封固。
結果