基本原理
富爾根氏核染色法是根據席夫氏(Schiff)試劑進行的反應而建立的。席夫氏試劑含有鹼性復紅和亞硫酸,鹼性復紅與亞硫酸結合後,失去醌式結構而變為無色,當DNA經酸作用後生成的醛化合物與席夫氏試劑結合後,使醌式結構恢復,合成一種帶紫紅色的鹼性復紅衍生物。這個染色法對DNA具有特異性。細菌細胞用此法染色後,可在普通光學顯微鏡下觀察到核。
富爾根氏染色法主要分兩步:(a)將細菌用1mol/LHCl溫和水解,使DNA中的嘌呤鹼與戊糖分開,放出戊糖的醛基;(b)放出的戊糖醛基與席夫氏試劑作用後呈紫紅色。
器材
1mol/LHCl,2%餓酸,Schandiun固定液,亞硫酸水溶液,席夫氏試劑,鋨酸蒸氣瓶;
釀酒酵母。
操作步驟
1.取培養8—10小時的釀酒酵母塗片,室溫下風乾。
2.將塗片置於有2%鋨酸的蒸汽瓶口上,用鋨酸蒸氣固定5分鐘,然後放入加熱至60℃的Schandiun固定液中10分鐘。
3.用水沖洗固定後的標本,然後放在60℃1mol/LHCl中水解8分鐘,水洗。
4.用席夫氏試劑作用30—40分鐘。
5.由席夫氏試劑中取出放在亞硫酸水溶液中洗5分鐘。
6.由亞硫酸水溶液中取出水洗,乾燥後,用油鏡觀察。