pas[一種化學反應的簡稱]

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過碘酸希夫反應,簡稱為 PAS反應(periodic acid Schiff reaction〕。其化學反應的基本過程多糖分子一般含有醛基,通過過碘酸的氧化作用,使多糖暴露出醛基,醛基與無色鹼性品紅結合反應,於多糖存在的部位形成新的紫紅色複合物,通過顯微鏡觀察而對組織細胞內的糖原、糖蛋白或粘多糖等化學成分進行定位、定性和定量的研究。

基本信息

概況

PAS染色法Periodic Acid- Schiff stain)在組織學上,主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應使呈現紫紅色。

原理

PAS染色又稱糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質。

原理:過碘酸能使細胞內的多糖乙二醇基氧化成乙二醛,再與 Schiff氏液的無色品紅結合,紅色,定位於胞漿上。

套用

隨著醫學實驗技術的發展,糖原染色套用的範圍更加廣泛,如用以證明與鑑別細胞內空泡狀的性質 ,心肌病變及其他心血管疾病的診斷 ,糖原累積病診斷和研究 ,糖尿病的診斷和研究 ,用於某些腫瘤的診斷等。除用於糖原的鑑定和黏液的顯示外 ,還可以觀察腎小球基底膜 、結腸杯狀細胞 中性黏液物質 、阿米巴滋養體和黴菌的著色。臨床診斷、分類和治療提供 了重要的依據。

方法

固定液

Carnoy固定液: 純酒精 60 ml  冰醋酸 10ml氯仿 30ml,也可以選用75%酒精.

液配製

1) 過碘酸酒清夜配法:

過碘酸 (HIO .2H O) 0.4g  95%酒精 35ml  M/5醋酸鈉 (2.72g+蒸餾水100ml) 5ml蒸餾水 10ml

保存於冰櫃內,用棕色瓶,可用兩周.

2) Schiff氏液:

0.5克鹼性品紅加入100毫升蒸餾水中,時時搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解.冷卻至50℃後過濾加入10毫升1N鹽酸.冷卻至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸鈉,在室溫中至少靜置24小時,然後密封冰櫃保存.

3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml  1N HCI 0.5ml  純酒精 23ml

4) 亞硫酸水 1%偏重亞硫酸鈉10ml  1N HCI 10ml  蒸餾水 180ml的樹膠溶解。

5)哈瑞或邁耶蘇木精 略

染色步驟

1. 石蠟切片脫蠟至水(細胞塗片,冰凍切片直接水洗)

2. 蒸餾水洗

3. 過碘酸酒清夜10min

4. 自來水沖洗10min

5. Schiff氏液10min

6. 流水沖洗5min

7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化)

8. 流水沖洗5min

9. 常規脫水、透明、封固

結果

PAS陽性為紅色,細胞核藍色。

實驗效果

準備

1、10g/L過碘酸液

2、Schiff染液:

鹼性品紅0.5g

DH2O 100ml

煮沸後,待片刻,加入鹼性品紅,振盪數分鐘使品紅溶解,冷至50℃加入1M的鹽酸20ml,混勻。待冷

卻至25℃加入偏重亞硫酸鈉0.5g,混合,置於帶塞的棕色瓶中,放於暗處24小時,染液為無色,如為微紅則

加活性炭1-2g,混合過濾,如過濾液仍有紅色,應再加少許活性炭,時紅色完全被吸收為止。製成後置於棕色

瓶內保存在冰櫃備用,如變為紅色,則不能使用。

4、蘇木素液:

蘇木素0.9g

95%乙醇 10ml

銨(鉀)明礬 20g

DH2O 200ml

將蘇木素溶於95%的乙醇,鉀明礬溶於水(可加熱),然後將蘇木素液加入明礬液中混合,用強火煮

沸後加氧化汞0.5g,迅速攪拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日過濾,臨用時取此液95ml加冰醋酸

5ml,可使細胞著色清楚。

方法

1、將新鮮血片或骨髓片用95%乙醇固定10分鐘。

2、10g/L過碘酸液作用20分鐘

3、DH2O洗滌幾次,晾乾

4、Schiff染液,60分鐘

5、用自來水洗滌15分鐘(細水長流沖洗)

6、蘇木素染液10分鐘。

7、自來水沖洗15分鐘,待乾。

結果

陽性反應,胞漿呈紅色,陰性反應,胞漿呈無色;

在正常血片中RBC不染色;

PLT染成深紅色;

中性粒細胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細胞有陽性顆粒;

單核細胞的胞漿染成淡紅色,可含有細小或粗大陽性顆粒;

少數淋巴細胞的胞漿內含有少許小的淡紅色或紅色顆粒;

正常骨髓的幼稚細胞和有核RBC都不染色;

巨核細胞的胞漿內呈彌散紅色或深紅色。

巨核細胞的胞漿內呈彌散紅色或深紅色。

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