染色用途
主要用於各種阿米巴和藍氏賈第鞭毛蟲滋養體和包囊的染色鑑定。
染色方法
用竹籤挑取糞便少許,按一個方向在潔淨的載玻片上塗成薄糞膜,立即放入60℃的肖丁固定液2分鐘。依次將標本放入碘酒精、70%及50%酒精中各2分鐘,用蒸餾水洗1次。再置於40℃2%鐵明礬溶液2分鐘,流水沖洗2分鐘,放入40℃0.5%蘇木精溶液中染色5~10分鐘,再流水沖洗2分鐘,放入冷2%鐵明礬溶液中退色2分鐘。將載玻片置顯微鏡下檢查退色情況(觀察時勿使玻片乾燥),如顏色偏深,應繼續退色,直至核膜、核仁均清晰可見為止。然後,流水沖洗15~30分鐘,至標本顯現藍色,再用蒸餾水洗1次。繼而,依次在50%、70%、80%、95%酒精(2次)中逐漸脫水各2分鐘。在二甲苯中透明3~5分鐘後用中性樹膠封片。染色後,原蟲胞質呈灰褐色,胞核、包囊內的擬染色體及溶組織內阿米巴滋養體吞噬的紅細胞均被染成墨色,糖原泡則被溶解呈空泡狀。
染色試劑準備
蘇木精染液的配製
蘇木精粉10g,溶於95%酒精100ml中,裝入250ml大口玻瓶內,加塞置室溫中6~8周,使之充分氧化。如將玻瓶曬於陽光下,每日振搖,可加速成其氧化,便於應急使用。氧化成熟的染液滴於水中呈鮮艷紫色,未氧化成熟染液則呈淡紅或紅紫色。此為原液,使用時,按1∶19加蒸餾水配成0.5%染液,此染液可保存3~6個月。
碘酒精配製
先用碘化鉀10g溶於100ml蒸餾水中,再加結晶碘5g,溶解後貯於棕色瓶中,該液即為盧戈碘液。在70%酒精中加數滴盧戈碘液即為碘酒精。2%鐵明礬溶液配製:硫酸鐵銨2g,溶於100ml蒸餾水中,臨用前配製。
肖丁固定液配製
飽和氯化高汞水溶液2份加95%酒精1份配成100ml,用前再加冰醋酸5ml,並加熱至40℃。