簡介
鈣測定是指含鈣量的測定。分很多種，有食物中鈣測定，細胞中鈣測定血清鈣測定，骨鈣，尿鈣等。
細胞內鈣測定方法
細胞懸液製備：
將新鮮組織放於含1.3mM/LCaCl2的冷Hanke’s液（0-4℃）中，沖洗2-3次，以剪刀將組織剪至碎塊，置於1.3mM/LCaCl2的冷Hanke’s液，以毛玻璃輕輕研磨，通過200目篩網吸取懸液，1000rpm/5min，加紅細胞裂解液5-10min,1000rpm/5min，用含1.3mM/LCaCl2Hanke’s洗2次，去除細胞碎片。台盤藍排斥試驗查細胞存活率在95%以上，用0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液調細胞數為2×106/ml。將該細胞懸液37℃預溫10min，加入Fura-2/AM（終濃度為2-5ug/ml），37℃恆溫震盪45min,負載後細胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次，用Hank’s液調細胞數為1×106，測定前37℃復溫5-10min。
所需試劑：Fura-2/AM,200人份，以1ml二甲亞碸無菌條件下稀釋，-20℃貯存。Hank’s液。
紅細胞裂解液，0.2%牛血清白蛋白Hank’s液，0.5mMEgta,pH8.5，TritonX-100
測定原理：
Fura-2有兩種形式：Fura-2/AM(acetoxymethylester,AM)和游離酸Fura-2。Fura-2因有較強的親水性，難以進入細胞，只有將其做成親酯的乙醯羥甲基酯，即Fura-2/AM後方可通過細胞膜，隨後被胞漿的非特異性酯酶水解，生成Fura-2，後者與胞漿游離Ca2有高親和力，與之結合形成Fura-2-Ca2複合物。後者的激發光譜高峰分別為380nm和340nm，分別較Fura-2的螢光強度大大增強，並且激發波長從380nm移至340nm。相應於380nm處螢光側減弱，而340nm處螢光增強。這種螢光比值變化的Ca2依賴性成為敏感的定量測定Ca2濃度的螢光比值技術的基礎。Ca2濃度在10-5～10-3umol/L時，其螢光發射強度與[Ca2]I之間存在一定函式關係。通過測定指示劑負載的細胞螢光強度便可測定[Ca2]i.理論上，將細胞徹底沖洗以去除細胞外染料和校正細胞的自動螢光後，負載有染料(dyeoades)的細胞的螢光光譜能細胞漿Ca2濃度。Ca2與螢光染料的解離常數Kd與細胞內Ca2濃度的螢光強度水平由多種因素決定。包括染料內產生的螢光的量、細胞懸液中細胞的濃度、Ca2指示劑在胞漿中的濃度和細胞的自動螢光等。
