保存條件
2-8℃保存。
使用說明
組織細胞樣品:
1.新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,離心棄去上清液;
2.從4℃冰櫃中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向細胞沉澱中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液),輕輕吹打混勻;
3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
4.收集沉澱部分,加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次;
5.如裂解不完全可重複步驟2和3;
6.重懸細胞,用於後續實驗;如提取RNA,最好是於步驟4開始使用DEPC水配製的溶液中進行。
血細胞:
1.新鮮抗凝血,離心棄去上清液;
2.取出4℃冰櫃預冷的ELS裂解液,按1:6-10的比例向細胞沉澱中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液),輕輕吹打混勻;
3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
4.收集沉澱部分,加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次;
5.如裂解不完全可重複步驟2和3;
6.重懸細胞,用於後續實驗;如提取RNA,最好是於步驟4開始使用DEPC水配製的溶液進行。
作用原理
細胞裂解液一般都用的是含酶的,在血紅細胞表面上有紅細胞專屬的表面抗原,當裂解液中含可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的時候 就只會造成紅細胞的變形,生物通道擴大,膨脹,裂解,或者引起紅細胞的變性.而不會攻擊其他細胞.另外紅細胞有自己的電負性,滲透脆性(通常是一些非酶細胞裂解液的突破點) ,懸浮穩定性,這都是區別於其他種類細胞的區別點.紅細胞裂解液就是利用這些特性裂解紅細胞的.另外紅細胞裂解液不能達到100% 準確的裂解紅細胞,總會或多或少導致其他種類細胞的裂解.