親和偶聯

用氨甲蝶呤偶聯瓊脂糖親和吸附法從人菌體展示文庫中篩選氨甲蝶呤相互作用蛋白 利用氨甲蝶呤(MTX)偶聯瓊脂糖凝膠吸附法從人肝臟細胞cDNA噬菌體展示文庫中篩選與MTX相互作用的蛋白. http://scholar.ilib.cn

概念

用氨甲蝶呤偶聯瓊脂糖親和吸附法從人菌體展示文庫中篩選氨甲蝶呤相互作用蛋白

方法

利用氨甲蝶呤(MTX)偶聯瓊脂糖凝膠吸附法從人肝臟細胞cDNA噬菌體展示文庫中篩選與MTX相互作用的蛋白.

過程

:以偶聯於瓊脂糖凝膠表面的MTX為配基,通過"結合-洗脫-擴增"過程篩選與MTX相互作用的噬菌體.利用PCR對篩選

糖蛋白

結果進行監測,對篩選得到的噬菌體PCR產物進行序列測定和基因同源性分析.結果:通過五輪親和篩選富集到特異噬菌體克隆,再通過PCR獲得cDNA插入片段.通過BLAST程式搜尋GenBank,證明篩選到的片段與人PI-3K相關蛋白激酶SMG-1異構體1蛋白同源性達100﹪

結論

利用偶聯MTX的瓊脂糖凝膠作為篩選基質,從T7噬菌體展示cDNA文庫中富集特異噬菌體是一種方便、高效的MTX相互作用靶蛋白篩選方法,可為探討小分子藥物的分子作用機制提供借鑑和參考.

影響

隨著新的合成基質和偶聯化合物的出現以及對IAC研究的深人，必將使免疫親和色譜在工業性生產純化蛋白質的套用逐漸得到發展。