脒基酶

脒基酶一種化學品，成功構建、表達和純化了重組SSAT蛋白，為製備其抗體及研究該基因與結直腸腫瘤的關係提供了有力的工具。

概述

脒基酶

構建人精脒/精胺N1乙醯基轉移酶基因的原核表達載體，誘導該質粒在大腸桿菌中表達並純化其表達的重組蛋白。方法從大腸癌組織中提取總RNA，採用RTPCR法擴增人SSAT基因的cDNA片段，經TA克隆及亞克隆方法構建原核表達載體pTriEx4SSAT。將重組表達質粒轉化入E.coliJM109(DE3)中，經IPTG誘導表達，SDSPAGE電泳和Westernblot鑑定表達蛋白，並通過6Histag，利用親和層析法純化表達的融合蛋白。結果酶切鑑定和DNA測序顯示，人SSAT的cDNA片段成功插入表達載體pTriEx4中，而且方向正確，SDSPAGE電泳顯示表達出20?kD的外源蛋白。Westernblot檢測結果顯示，表達出的蛋白為6Histag的融合蛋白，而且用NiNTA親和層析法純化了該重組蛋白。結論成功構建、表達和純化了重組SSAT蛋白，為製備其抗體及研究該基因與結直腸腫瘤的關係提供了有力的工具。

相關詞條

基因、載體、蛋白、電泳、克隆