缺損突變體

方法在表達完整HBV顆粒的質粒上，經基因修飾後分別表達核心-P蛋白及核心-表面抗原的融合蛋白，整合於具有HBV複製的2．2．15細胞，形成細胞克隆，ELISA法檢測細胞培養上清液中HBsAg和HBeAg，斑點雜交法檢測細胞內HBV核殼中HBVDNA，PCR檢測上清液中重組HBV顆粒。 在表達完整HBV顆粒的質粒上，經基因修飾後分別表達兩種類型顯性陰性突變體，整合於具有HBV複製的2.2.15細胞，形成細胞克隆，ELISA法檢測細胞培養上清液中HBsAg和HBeAg，斑點雜交法檢測細胞內HBV核殼中HBVDNA，PCR檢測上清液中重組HBV顆粒。 結論：經過對HBV基因組的改造，在細胞內表達顯性陰性突變體具有干擾HBV複製及抑制HBV抗原表達的作用；在2.2.15細胞中野生型HBV輔助下，仍能包裝成完整的HBV樣顆粒並分泌到細胞外，未來臨床套用有望實現放大效應。

HBV作為基因治療載體的可能性及檢驗HBV點突變表達顯性陰性突變體抗HBV的作用。方法在表達完整HBV顆粒的質粒上，經基因修飾後分別表達核心-P蛋白及核心-表面抗原的融合蛋白，整合於具有HBV複製的2．2．15細胞，形成細胞克隆，ELISA法檢測細胞培養上清液中HBsAg和HBeAg，斑點雜交法檢測細胞內HBV核殼中HBVDNA，PCR檢測上清液中重組HBV顆粒。結果2．2．15-pMEP4組、2．2．15-CP組、2．2．15-CS組，對HBsAg平均抑制率分別為2．74％±3．83％．40．08％±2．05％(P<0．01)和52．94％±1．93％(P<0．01)；對HBeAg平均抑制率分別為4．46％±4．25％、52．86％±1．32％(P<0．01)和41．60％±1．65％(P<0．01)；對HBV複製的抑制率分別為15．3％、82．0％和67．2％。僅在2．2．15-CP組培養上清液中能檢測出突變型HBV顆粒。結論在細胞內表達顯性陰性突變體具有干擾HBV複製及抑制HBV抗原表達的作用；經修飾後的HBV基因組在野生型HBV輔助下．仍能包裝並分泌完整的HBV樣顆粒。
在表達完整HBV顆粒的質粒上，經基因修飾後分別表達兩種類型顯性陰性突變體，整合於具有HBV複製的2.2.15細胞，形成細胞克隆，ELISA法檢測細胞培養上清液中HBsAg和HBeAg，斑點雜交法檢測細胞內HBV核殼中HBVDNA，PCR檢測上清液中重組HBV顆粒。
結果：2.2.15-pMEP4組、2.2.15-CP組、2.2.15-CS組，對HBsAg平均抑制率分別為2.74±3.83%、40.08±2.05%(P＜0.01)和52.94±1.93%(P＜0.01)；對HBeAg平均抑制率分別為4.46±4.25%、52.86±1.32%(P＜0.01)和41.60±1.65%(P＜0.01)；對HBV複製的抑制率分別為15.3%、82.0%和67.2%。僅有2.2.15-CP組培養上清液中能檢測出突變型HBV顆粒。
結論：經過對HBV基因組的改造，在細胞內表達顯性陰性突變體具有干擾HBV複製及抑制HBV抗原表達的作用；在2.2.15細胞中野生型HBV輔助下，仍能包裝成完整的HBV樣顆粒並分泌到細胞外，未來臨床套用有望實現放大效應。

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順式作用元件	基因領域效應	分子遺傳學
外顯子	松果腺	分子雜交

參考連結

1、http://www.helixnet.cn/archiver/tid-2721.html
2、http://scitech.people.com.cn/GB/other2137/
3、http://book.sina.com.cn/nzt/spi/gongzuodna/