方法:針對現有DOP-PCR擴增過程中存在的影響產物產量和特異性的因素進行分析,分別從不同的DNA模板來源、模板梯度稀釋與否以及DOP-PCR擴增產物是否採用低熔點膠回收去除干擾分析的小片段等方面進行研究,最後以特異性基因(FTCD和CBS)PCR擴增的結果作為評價指標,了解上述因素對DOP-PCR擴增的影響。結果:以小鼠單個卵細胞基因組為模板與以肝基因組DNA為模板相比,在產量上前者明顯低於後者,特異性上兩者相當。
小鼠肝基因組DNA梯度稀釋作為模板進行擴增的結果沒有明顯差異。與未經低熔點膠回收的DOP-PCR產物相比,經低熔點膠回收的DOP-PCR產物在常規PCR擴增反應中得到的產物特異性更好。結論:套用DOP-PCR方法進行擴增時,小鼠單個卵細胞可以用來進行DOP-PCR的擴增從而用於對特異性基因的檢測,但是在擴增產量方面需要進一步的改進或最佳化。對現有DOP-PCR反應進行產物低熔點膠回收純化,能夠增加產物的特異性,效果滿意。
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參考連結
1、http://www.helixnet.cn/archiver/tid-2721.html
2、http://scitech.people.com.cn/GB/other2137/
3、http://book.sina.com.cn/nzt/spi/gongzuodna/
