抗鏈球菌溶血素O試驗

鏈球菌溶血素O（streptolysin O，SLO）是溶血性鏈球菌的代謝產物之一，具有溶血作用和抗原性。人受溶血性鏈球菌感染後2-3周，體內便產生抗鏈球菌溶血素O的抗體。本實驗基於抗原抗體中和試驗的原理，用具有溶血能力的還原型溶血素O檢驗血清中有無中和抗體產生。凡查出病人血清中次抗體效價顯著升高，超過400單位，可認為患者近期被溶血性鏈球菌感染過，並用以輔助診斷風濕熱、腎小球腎炎等病患。

基本信息

• 中文名：抗鏈球菌溶血素O試驗
• 英文名：streptolysin O，SLO

• 細菌：溶血性鏈球菌
• 作用：溶血作用和抗原性

概述

抗鏈球菌溶血素"o"校準品

抗鏈球菌溶血素“O”試驗，簡稱抗“O”，是機體產生的以鏈球菌溶血素O為抗原的抗體。通過測定血清中的ASO抗體效價，來判斷病人有無A族溶血性鏈球菌感染，可作為A族溶血性鏈球菌感染性疾病的輔助診斷方法之一。但本試驗無特異性意義，因為A族鏈球菌感染後，可引起人類多種疾病，如鏈球菌感染引起相應的扁桃體炎、猩紅熱、急性腎炎、亞急性細菌性心內膜炎、腎病綜合徵等均可引起ASO升高。人感染溶血性鏈球菌後，血清中可以出現多種抗體，如抗鏈激酶抗體、抗透明質酸抗體和抗“O”溶血素抗體，而抗“O”溶血素抗體對檢測風濕病是否活動的一種血清學診斷試驗較有意義。風濕病活動期60%～80%的病人ASO是升高的，多次檢測均正常有助於排除風濕病。

原理

鏈球菌溶血素O對氧不穩定，在空氣中迅速失去溶血活力，檢測ASO時，先將鏈球菌溶血素O還原，恢復其溶血活力，再與不同稀釋度的病人血清混合，繼加O型紅細胞或兔紅細胞懸液作為指示劑。如溶血素O被血清中的相應抗體所中和，則加入的指示紅細胞不被溶解。如血清中無相應抗體或抗體量不足以中和加入的溶血素，則發生不同程度的溶血現象。

材料

血清1:15稀釋的患者血清和對照（正常）血清。
其他鏈球菌溶血素“O”1U、鏈球菌溶血素喔“O”乳膠試劑、黑底玻片及滴管等。

試劑

（1）溶血素O：有商品供應，按說明書稀釋後使用，溶血素O活性（結合單位）的標定必須用丹麥國立血清研究所製備的WHO標準抗溶血素O抗體精確滴定。溶血素O對熱不穩定，短期保存可存放於4～10℃冰櫃，幾個月以上應低溫冰凍貯存。
（2）ASO緩衝液：取磷酸氫二鈉十二水合物9.06g，磷酸二氫鈉二水合物10.89g，氯化鈉4.6g，使溶於少量蒸餾水後並補足至1000ml，pH值為6.5。
（3）紅細胞懸液：取枸櫞酸鈉抗凝的兔或O型人血，用ASO緩衝液洗滌3次，最後1次洗滌後，必須經2000r/min離心10～15min，離心後儘可能吸盡無色的上清液，並以ASO緩衝液配製成5%懸液，用時輕輕搖勻。
（4）還原劑：商品還原片劑可按說明書使用，其主要成分是2∶1的無水亞硫酸氫鈉和無水亞硫酸鈉。也可在臨用前將ASO緩衝液以2mol/L氫氧化鈉校pH值到8.0，加入L-半胱氨酸鹽7g/L使溶解即成。

操作方法

（1）用ASO緩衝液將血清標本稀釋成1∶100和1∶500二個稀釋度。
（2）按說明書建議配製1結合單位/ml的還原溶血素O，準確吸取一定量溶血素，首先用還原劑溶液稀釋到最終體積的1/3左右，放置15min，使溶血素充分還原，然後準確稀釋到指定體積，在45min內使用。
（3）取70×100mm小試管按表1所列步驟操作，並以已知ASO單位的標準血清作對照。
（4）結果報告：主要觀察上清液是否有溶血現象，以呈完全不溶血的血清最高稀釋倍數為該標本的ASO單位/ml。

附註

（1）試管或試劑被膽固醇污染，樣品被細菌污染，特別是金黃魚葡萄球菌或綠膿桿菌，均可抑制溶血素溶血活力，從而引起假陽性結果。
（2）溶血素O結合單位的標定不準確或保存不當使所含單位數跌落，將嚴重影響結果。故需經常用已知單位的血清作對照，以便及時發現問題。