介紹
SspdnaB蛋白質內含子介導的重組人腦鈉素的製備
腦鈉素(BNP)是臨床治療代償失調性心衰竭的有效藥物.將腦鈉素與組氨酸標籤(His-tag)以及具有自我剪下功能的SspdnaB微型蛋白質內含子進行融合表達.表達產物經Ni-Sepharose親和層析及體外復性處理後,用CM-纖維素對復性產物進行了濃縮,並通過改變CM-纖維素柱內的pH及溫度,誘導SspdnaB微型蛋白質內含子的剪下作用,使腦鈉素從融合蛋白中釋放並與載體蛋白(His-DnaB)分離,再經C4反相高效液相色譜法進一步純化後,從每升培養液中獲得了2.8mg純度達97%的重組人腦鈉素.體外活性測定結果表明,重組人腦鈉素對兔胸主動脈條具有顯著的血管舒張效應,其EC50為1.94×10-6mg/mL.
蛋白內含子介導純化的表達載體的構建及套用
將抗膀胱癌單鏈抗體(PG)融合在蛋白內含子(intein)的C末端,利用intein的N末端具有的chitinbindingdomain(CBD)對幾丁質柱的吸附特性及intein的自切割活性對PG進行一次性純化。同時,引入大腸桿菌分子伴侶肽基脯氨醯順反異構酶(FkpA)與目的蛋白進行共表達及融合表達,以使目的蛋白以可溶形式存在。結果顯示,PG融合蛋白對幾丁質柱的吸附效率很高,intein的自切割釋放PG的效率也較高,但PG僅出現在SDS洗脫液中。FkpA與PG共表達能顯著地提高目的蛋白的可溶性。
