免疫等電聚焦

性質

又稱免疫電聚焦。是電泳分析方法之一。實際上它是免疫擴散電泳和等電聚焦技術相聯合的一種電泳分析方法。具體操作大致有三種情況。（1）圓盤免疫等電聚焦是用聚丙烯醯胺凝膠柱先行等電聚焦，把微克量樣品（如混合蛋白質）分開之後，把這凝膠柱條再包埋在具有緩衝體系的瓊脂凝膠中，各蛋白隨即擴散到瓊脂膠內，並與抗血清槽（在瓊脂膠板上）內擴散開的抗血甭（抗體）結合而成沉澱線；（2）把上述已分離的蛋白（在聚丙烯醯胺凝膠中）發刀下來填補在瓊脂凝膠板的孔中，用雙擴散試驗法分析其中的特異性抗原；（3）像免疫電泳那樣直接在玻片上作瓊脂免疫等電聚焦。這一方法主要用於鑑定抗原。以免疫電泳優越之處在於能在選定的PH範圍內完成蛋白（抗原）的分離，並提高了分辨力。

解釋

等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，當蛋白質放進此體系時，不同的蛋白質即移動到或聚焦於與其等電點相當的pH位置上，電聚焦的優點是：有很高的解析度，可將等電點相差0.01-0.02pH單位的蛋白質分開；一般電泳由於受擴散作用的影響，隨著時間和所走的距離加長，區帶越走越寬，而電聚焦能抵消擴散作用，使區帶越走越窄；由於這種電聚焦作用，不管樣品加在什麼部位，都可聚焦到其電點，很稀的樣品也可進行分離；可直接測出蛋白質的等電點，其精確度可達0.01pH單位。電聚焦技術的缺點是：一是電聚焦要求用無鹽溶液，而在無鹽溶液中蛋白質可能發生沉澱，二是樣品中的成分必需停留於其等電點，不適用在等電點不溶或發生變性的蛋白質。電聚焦技術要求有穩定的pH梯度，要求極防止對流和防止已分離區帶再混合的措施，其辦法有三：密度梯度，聚丙烯醯胺凝膠和區帶對流聚焦，以第一種方法為常用。

相關詞條

電泳、圓盤免疫、沉澱線、聚丙烯醯胺凝膠柱、蛋白、無鹽溶液