理化性質
乳酸脫氫酶LDH催化丙酮酸與乳酸之間還原與氧化反應，在鹼性條件下促進lacticacid向pyruvicacid方向的反應，而在中性條件下促進pyruvicacid向lacticacid的轉化（為逆反應）。LDH是參與糖無氧酵解和糖異生的重要酶。
由於LDH幾乎存在於所有體細胞中，而且在人體組織中的活性普遍很高，所以血清中LDH的增高對任何單一組織或器官都是非特異的。在AMI時升高遲、達峰晚，故對早期診斷價值不大。由於半壽期長（10～163小時），多用於回顧性診斷，如對入院較晚的AMI病人、亞急性MI的診斷和病情監測。
LDH在組織中的分布特點是心、腎以LDH1為主，LDH2次之；肺以LDH3．LDH4為主；骨骼肌以LDH5為主；肝以LDH5為主，LDH4次之。血清中LDH含量的順序是LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5.
正常參考值
乳酸脫氫酶A正常參考值
（1）瓊脂糖電泳法：
LDH1（28.4±5.3）%；
LDH2（41.0±5.0）%；
LDH3（19.0±4.0）%；
LDH4（6.6±3.5）%；
LDH5（4.6±3.0）%。
（2）醋酸纖維素薄膜法：
LDH1（25.32±2.62）%
LDH2（34.36±1.57）%
LDH3（21.86±1.38）%
LDH4（11.3±1.84）%
LDH5（7.97±1.59）%
（3）聚丙烯醯胺法：
LDH1（26.9±0.4）%
LDH2（36.0±0.5）%
LDH3（21.9±0.4）%
LDH4（11.1±0.4）%
LDH5（4.1±0.3）%
總之，健康成人血清LDH同工酶有如下的規律：LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。
臨床意義
（1）心肌細胞LDH活性遠高於血清數百倍，尤以LDH1和LDH2含量最高，LDH2占主導地位。急性心肌梗塞時，血清LDH1和LDH2顯著升高，約95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大於1，且LDH1升高早於LDH總活性升高。LDH在心肌梗死後上升速度比肌酸激酶慢很多，所以LDH上升在血液中存在時間較長，使得LDH成為診斷心肌梗死發生一周以上的有效工具。病毒性和風濕性心肌炎及克山病，出現心肌損害時，病人的血清LDH同工酶的改變與心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1還見於溶血性貧血、地中海貧血、惡性貧血、鐮形細胞性貧血、腎臟損傷、腎皮質梗塞、心肌損傷性疾病、瓣膜病等。
（2）腦幹含LDH1較高。頗腦損傷僅累及大腦半球時，只有血清同工酶譜的絕對值增高，而不影響同工酶的相互比值，如果累及腦幹時，病人血清LDH1的含量也增高。
（3）急性心肌梗塞發病後12～24小時，血清LDH1也已升高。若同時測定LDH總活性，可發現LDH1/總LDH的比值升高。早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高更早，更明顯，導致LDH1/LDH2的比值升高。對急性心肌梗塞診斷的陽性率和可靠性優於單純測定LDH1或CK-MB。
（4）胚胎細胞瘤病人的血清LDH1活性升高。
（5）急性肝炎，肝細胞損傷或壞死後，向血流釋入大量的LDH4和LDH5，致使血中LDH5/LDH4比值升高，故LDH5/LDH4>1可做為肝細胞損傷的指標。急性肝炎以LDH5明顯升高，LDH4不增，LDH5/LDH4>1為特徵；若血清LDH5持續升高或下降後再度升高，則可認為是慢性肝炎；肝昏迷病人的血清LDH5．LDH4活性極高時，常示預後不良；原發性肝癌以血清LDH4>LDH5較為常見。
（6）腎皮質以LDH1和LDH2含量較高，腎髓質以LDH4和LDH5活性較強。患急性腎小管壞死（ATN）、慢性腎盂腎炎、慢性腎小球腎炎以及腎移植排異時，血清LDH5均可增高。
（7）肺含LDH3較多，肺部疾患時血清LDH3常可升高。肺梗塞時LDH3和LDH4相等，LDH1明顯下降；肺膿腫病人的血清LDH3．LDH4常與LDH5同時升高。煤礦、鎢礦矽肺病人的血清LDH1．LDH2下降，LDH4．LDH5升高。
（8）血清LDH總活性升高而同工酶譜正常（LDH1/LDH2<1）的病例，臨床出現率依次為；心肺疾病、惡性腫瘤、骨折、中樞神經系統疾患、炎症、肝硬化、傳染性單核細胞增多症、甲狀腺功能減退、尿毒症、組織壞死、病毒血症、腸梗阻等。
（9）肌營養不良病人肌肉中LDH1．LDH2明顯增高，LDH5顯著下降；而血清則相反，LDH1．LDH2明顯減少，LDH4．LDH5顯著，表明血清LDH同工酶主要來自肌肉組織。
（10）惡性病變時LDH3常增高。
升高的原因
至於乳酸脫氫酶高的原因，有以下方面：1．當B肝病毒攜帶者病情惡化成B肝患者時，部分肝細胞受損，血清中LDH4和LDH5含量就會有不同程度的增高。
2．B肝治療方法特別是是用藥不當，長期服用同一種藥物時造成腎毒現象的產生。當腎毒現象出現時，血清中乳酸脫氫酶含量會迅速升高。
3．B肝不進行合適積極的治療，發展到一定程度時會造成肝臟代謝嚴重異常，導致腎臟功能衰竭，從而也會引起乳酸脫氫酶含量升高。
4．肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉移所致的胸腹水時，會引起乳酸脫氫酶的偏高[3]。
偏低的原因
乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶偏低的原因1：檢查過程中出現誤差;
乳酸脫氫酶偏低的原因2：內分泌失調;
乳酸脫氫酶偏低的原因3：過於勞累、睡眠不好、心情不好等。
總之，乳酸脫氫酶偏低一般不是很嚴重，經過調理即可恢復。但如果出現乳酸脫氫酶偏高就要引起重視了。因為肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉移所致的胸腹水時，會引起乳酸脫氫酶的偏高。
LDH實驗
乳酸脫氫酶實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，製成固相載體，往包被抗D-LDH抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗D-LDH抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌後用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D-LDH呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配製
1.酶聯板（Assayplate）：一塊（96孔）。
2.標準品（Standard）：2瓶（凍乾品）。
3.樣品稀釋液（SampleDiluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7.辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。
9.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.終止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。
需要而未提供的試劑和器材
1.標準規格酶標儀
2.高速離心機
3.電熱恆溫培養箱
4.乾淨的試管和Eppendof管
5.系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器
6.蒸餾水，容量瓶等
操作步驟
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時儘量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩乾，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內配製），37℃，60分鐘。
3.溫育60分鐘後，棄去孔內液體，甩乾，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩乾。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液）100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘後，棄去孔內液體，甩乾，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩乾。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，後3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應儘量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到後應儘快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液後15分鐘以內進行檢測。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。注意事項
1.當混合蛋白溶液時應儘量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3.一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。
5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋後再測定，計算時請最後乘以稀釋倍數。
6.在配製標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配製，不能混淆。
7.底物請避光保存。
8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
乳酸脫氫酶偏高怎么辦
血清中乳酸脫氫酶偏高主要有惡性腫瘤，肝炎、肝硬化等疾病引起的，乳酸脫氫酶檢查偏高常見於急性肝炎、阻塞性黃疸、心肌炎、惡性腫瘤、肝硬化、肝癌、運動肌肉營養不良、急性白血病及惡性貧血等病症。臨床醫學實踐表明，80%以上患者體內的血清乳酸脫氫酶升高是由肝臟疾病引起的，尤其是急性B肝、肝硬化、肝癌等。因此，若患者發現乳酸脫氫酶在血清中的含量不再正常範圍之內，應及時到肝病醫院進行檢測，在醫生的指導下進行有針對性的治療。
