MS培養基配方

MS培養基配方

MS培養基的作用是植物組織培養中常用的一種培養基是MS培養基。

基本信息

基本簡介

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MS培養基的配製包括以下步驟。培養基母液的配製和保存MS培養基含有近30種營養成分,為了避免每次配製培養基都要對這幾十種成分進行稱量,可將培養基中的各種成分,按原量的20倍或200倍分別稱量,配成濃縮液,這種濃縮液叫做培養基母液。

配製步驟

這樣每次使用時,取其總量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀釋,製成培養液。現將製備培養基母液所需的各類物質的量列出,供配製時使用。

成分 分子量 使用濃度(mg/L)

大量元素

硝酸鉀 KNO3 101.11 1900
硝酸銨 NH4NO3 80.04 1650
磷酸二氫鉀 KH2PO4 136.09 170
硫酸鎂 MgSO4.7H2O 246.47 370
氯化鈣 CaCl2.2H2O 147.02 440

微量元素

碘化鉀 KI 166.01 0.83
硼酸 H3BO3 61.83 6.2
硫酸錳 MnSO4.4H2O 223.01 22.3
硫酸鋅 ZnSO4.7 H2O 287.54 8.6
鉬酸鈉 Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25
硫酸銅 CuSO4.5 H2O 249.68 0.025
氯化鈷 CoCl2.62 237.93 0.025

鐵鹽

乙二胺四乙酸二鈉 Na2.EDTA 372.25 37.3
硫酸亞鐵 FeSO24.7H2O 278.03 27.8

有機成分

肌醇 100
甘氨酸 2
鹽酸硫胺素 VB1 0.1
鹽酸吡哆醇 VB6 0.5
煙酸 VB5或VPP 0.5
蔗糖 sucrose 342.31 30g/L
瓊脂 agar 7 g/L

配製方法

以上各種營養成分的用量,除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外,其餘的均為200倍濃縮液。 上述幾種母液都要單獨配成1 L的貯備液。其中,

母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配製方法是:每種母液中的幾種成分稱量完畢後,分別用少量的蒸餾水徹底溶解,然後再將它們混溶,最後定容到1 L。

母液Ⅲ的配製方法是:將稱好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450 mL蒸餾水中,邊加熱邊不斷攪拌使它們溶解,然後將兩種溶液混合,並將pH調至5?5,最後定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。各種母液配完後,分別用玻璃瓶貯存,並且貼上標籤,註明母液號、配製倍數、日期等,保存在冰櫃的冷藏室中。

MS培養基中還需要加入:2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、[烈宜醄NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生長調節物質,並且分別配成母液(0?1 mg/mL)。其配製方法是:分別稱取這3種物質各10 mg,將2,4-D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預溶,將6-BA用少量(1 mL)的物質的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解過程需要水浴加熱,最後分別定容至100 mL,即得質量濃度為0?1 mg/mL的母液。

配製培養液:用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量:母液Ⅰ為50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2,4?D 5 mL、NAA 1 mL,與各種母液一起放入燒杯中。

注意事項

配製培養液時應注意:

①在使用提前配製的母液時,應在量取各種母液之前,輕輕搖動盛放母液的瓶子,如果發現瓶中有沉澱、懸浮物或被微生物污染,應立即淘汰這種母液,

重新進行配製;

②用量筒或移液管量取培養基母液之前,必須用所量取的母液將量筒或移液管潤洗2次;

③量取母液時,最好將各種母液按將要量取的順序寫在紙上,量取1種,劃掉1種,以免出錯。溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蔗糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入[url水[/urmL,用電爐加熱,邊加熱邊用玻璃棒攪拌,直到液體呈半透明狀。然後再將配好的混合培養液加入到煮沸的瓊脂中,最後加蒸餾水定容至1 000 mL,攪拌均勻。

需要注意的是,在加熱瓊脂、製備培養基的過程中,操作者千萬不能離開,否則沸騰的[url[/ur,就需要重新稱量、製備。此外,如果沒有搪瓷量杯,可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水,否則加熱時燒杯容易炸裂,使溶液外溢,造成燙傷。調pH 用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培養基中,邊滴邊攪拌,並隨時用精密的pH試紙(5.4~7.0)測培養基的pH,一直到培養基的pH為5.8為止(培養基的pH必須嚴格控制在5.8)。培養基的分裝 溶化的培養基應該趁熱分裝。分裝時,先將培養基倒入燒杯中,然後將燒杯中的培養基倒入錐形瓶(50 mL或100 mL)中。注意不要讓培養基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養基的量約為錐形瓶容量的1/5~1/4。每1 000 mL培養基,可分裝25~30瓶。培養基分裝完畢後,應及時封蓋瓶口。用2塊硫酸紙(每塊大小約為9 cm×9 cm)中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口,並用線繩綑紮。最後在錐形瓶外壁貼上標籤。

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