HAT選擇法

"HAT選擇法即胸苷激酶基因選擇法,胸苷激酶(Thymidin ase,簡稱TK)能催化胸苷(T)轉變成dTMP,進而生成dTTP。 該系統中的tk+基因能報告載體的導入,稱報告基因,培養基中含有H

HAT選擇法即胸苷激酶基因選擇法,胸苷激酶(Thymidine Kinase,簡稱TK)能催化胸苷(T)轉變成dTMP,進而生成dTTP。TK選擇系統將含有tk+基因的表達載體導入tk-宿主細胞,再用含有次黃嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸苷(T)的培養基培養細胞,其中A為葉酸類似物,可阻斷dATP,dGTP的合成,及dUMP到dTTP的轉化,但H可合成IMP,再由IMP合成dATP和dGTP,含有載體的tk+細胞能利用T合成dTTP,故可合成DNA使細胞存活,不含載體的tk-細胞不能利用T合成dTTP,無法合成DNA使細胞死亡。該系統中的tk+基因能報告載體的導入,稱報告基因,培養基中含有H,A和T,故將這種選擇方法稱做HAT選擇法。

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