前 言
本標準代替GB/T5009.87—2003《食品中磷的測定》 、GB5413.22—2010《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中磷的測定》、GB/T22427.11—2008《澱粉及其衍生物磷總含量測定》、GB/T9695.4—2009《肉與肉製品 總磷含量測定》、GB/T18932.11—2002《蜂蜜中鉀、磷、鐵、鈣、鋅、鋁、鈉、鎂、硼、錳、銅、鋇、鈦、釩、鎳、鈷、鉻含量的測定方法 電感耦合電漿原子發射光譜(ICP-AES)法》、GB/T23375—2009《蔬菜及其製品中銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷的測定》、NY/T1018—2006《蔬菜及其製品中磷的測定》、NY/T1738—2009《農作物及其產品中磷含量的測定 分光光度法》、SN/T0446—1995《出口乳製品中磷的檢驗方法》、SN/T0801.2—2011《進出口動植物油脂 第2部分:含磷量檢測方法》中磷的測定方法。
本 標準與GB/T5009.87—2003相比,主要變化如下:
———標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中磷的測定”;
———刪除重量法。
範圍
本標準規定了食品中磷含量測定的分光光度法和電感耦合電漿發射光譜法。
本標準第一法、第三法適用於各類食品中磷的測定,第二法適用於嬰幼兒食品和乳品中磷的測定。
鉬藍分光光度法
原理
試樣經消解,磷在酸性條件下與鉬酸銨結合生成磷鉬酸銨,此化合物被對苯二酚、亞硫酸鈉或氯化亞錫、硫酸肼還原成藍色化合物鉬藍。鑰藍在660nm 處的吸光度值與磷的濃度成正比。用分光光度計測定試樣溶液的吸光度,與標準系列比較定量。
試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規定的三級水。
試劑
硫酸(H2SO4):優級純。
高氯酸(HClO4):優級純。
硝酸(HNO3):優級純。
鹽酸(HCl):優級純。
對苯二酚(C6H6O2)。
無水亞硫酸鈉(Na2SO3)。
鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O]。
氯化亞錫(SnCl2·2H2O)。
硫酸肼(NH2NH2·H2SO4)。
試劑的配製
硫酸溶液(15%):量取15mL硫酸,緩慢加入到80mL水中,冷卻後用水稀釋至100mL,混勻。
硫酸溶液(5%):量取5mL硫酸,緩慢加入到90mL水中,冷卻後用水稀釋至100mL,混勻。
硫酸溶液(3%):量取3mL硫酸,緩慢加入到90mL水中,冷卻後用水稀釋至100mL,混勻。
鹽酸溶液(1+1):量取500mL鹽酸,加入500mL水,混勻。
鉬酸銨溶液(50g/L):稱取5g鉬酸銨,加硫酸溶液(15%)溶解,並稀釋至100mL,混勻。
對苯二酚溶液(5g/L):稱取0.5g對苯二酚於100mL水中,使其溶解,並加入一滴硫酸,混勻。
亞硫酸鈉溶液(200g/L):稱取20g無水亞硫酸鈉溶解於100mL水中,混勻。臨用時配製。
氯化亞錫-硫酸肼溶液:稱取0.1g氯化亞錫,0.2g硫酸肼,加硫酸溶液(3%)並用其稀釋至100mL。此溶液置棕色瓶中,貯於4℃可保存1個月。
標準品
磷酸二氫鉀(KH2PO4,CAS號7778-77-0):純度>99.99%。或經國家認證並授予標準物質證書的一定濃度的磷標準溶液。
標準溶液的製備
磷標準儲備液(100.0mg/L):準確稱取在105℃下乾燥至恆重的磷酸二氫鉀0.4394g(精確至0.0001g)置於燒杯中,加入適量水溶解並轉移至1000mL容量瓶中,加水定容至刻度,混勻。
磷標準使用液(10.0mg/L):準確吸取10mL磷標準儲備液(100.0mg/L),置於100mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。
儀器和設備
分光光度計。
可調式電熱板或可調式電熱爐。
馬弗爐。
分析天平:感量0.1mg和1mg。
分析步驟
試樣製備
在採樣和試樣製備過程中,應避免污染。
糧食、豆類
樣品去除雜物後,粉碎,儲於塑膠瓶中。
蔬菜、水果、魚類、肉類等樣品
樣品用水洗淨,晾乾,取可食部分,製成勻漿,儲於塑膠瓶中。
飲料、酒、醋、醬油、食用植物油、液態乳等液體樣品將樣品搖勻。
試樣前處理
濕法消解
稱取試樣0.2g~3g(精確至0.001g)或準確吸取液體試樣0.500mL~5.00mL於帶刻度消化管中,加入10mL硝酸,1mL高氯酸,2mL硫酸,在可調式電熱爐上消解(參考條件:120℃/0.5h~1h、升至180℃/2h~4h、升至200℃~220℃)。若消化液呈棕褐色,再加硝酸,消解至冒白煙,消化液呈無色透明或略帶黃色。消化液放冷,加20mL水,趕酸。放冷後轉移至100mL容量瓶中,用水多次洗滌消化管,合併洗液於容量瓶中,加水至刻度,混勻。作為試樣測定溶液。同時做試劑空白試驗。亦可採用錐形瓶,於可調式電熱板上,按上述操作方法進行濕法消解。
乾法灰化
稱取試樣0.5g~5g(精確至0.001g)或準確移取液體試樣0.500mL~10.0mL,在火上灼燒成炭分,再於550℃下成灰分,直至灰分呈白色為止(必要時,可在加入濃硝酸潤濕蒸乾後再灰化),加10mL鹽酸溶液(1+1),在水浴上蒸乾。再加2mL鹽酸溶液(1+1),用水分數次將殘渣完全洗入100mL容量瓶中,並用水稀釋至刻度,搖勻。同時做試劑空白試驗。
測定
注:可任選苯二酚、亞硫酸鈉還原法或氯化亞錫、硫酸肼還原法。
對苯二酚、亞硫酸鈉還原法
標準曲線的製作
準確吸取磷標準使用液0mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL,相當於含磷量0μg、5.00μg、10.0μg、20.0μg、30.0μg、40.0μg、50.0μg,分別置於25mL具塞試管中,依次加入2mL 鉬酸銨溶液(50g/L)搖勻,靜置。加入1 mL 亞硫酸鈉溶液(200g/L)、1 mL 對苯二酚溶液(5g/L),搖勻。加水至刻度,混勻。靜置0.5h後,用1cm 比色杯,在660nm 波長處,以零管作參比,測定吸光度,以測出的吸光度對磷含量繪製標準曲線。
試樣溶液的測定
準確吸取試樣溶液2.00mL及等量的空白溶液,分別置於25mL具塞試管中,加入2mL鉬酸銨溶液(50g/L)搖勻,靜置。加入1mL亞硫酸鈉溶液(200g/L)、1mL對苯二酚溶液(5g/L),搖勻。加水至刻度,混勻。靜置0.5h後,用1cm 比色杯,在660nm 波長處,測定其吸光度,與標準系列比較定量。
氯化亞錫、硫酸肼還原法
標準曲線的製作
準確吸取磷標準使用液0mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL,相當於含磷量0μg、5.00μg、10.0μg、20.0μg、30.0μg、40.0μg、50.0μg,分別置於25mL具塞試管中,各加約15mL 水,2.5mL 硫酸溶液(5%),2mL鉬酸銨溶液(50g/L),0.5mL氯化亞錫-硫酸肼溶液,各管均補加水至25mL,混勻。在室溫放置20min後,用1cm 比色杯,在660nm 波長處,以零管作參比,測定其吸光度,以吸光度對磷含量繪製標準曲線。
試樣溶液的測定
準確吸取試樣溶液2.00mL 及等量的空白溶液,分別置於25mL 比色管中,各加約15mL 水,2.5mL 硫酸溶液(5%),2mL鉬酸銨溶液(50g/L),0.5mL氯化亞錫-硫酸肼溶液。各管均補加水至25mL,混勻。在室溫放置20min後,用1cm 比色杯,在660nm 波長處,分別測定其吸光度,與標準系列比較定量。
分析結果的表述
試樣中磷的含量按式(1)計算:
食品中磷的測定…………………………(1)
式中:
X ———試樣中磷含量,單位為毫克每百克或毫克每百毫升(mg/100g或mg/100mL);
m1 ———測定用試樣溶液中磷的質量,單位為微克(μg);
m0 ———測定用空白溶液中磷的質量,單位為微克(μg);
V1 ———試樣消化液定容體積,單位為毫升(mL);
m ———試樣稱樣量或移取體積,單位為克(g或mL);
V2 ———測定用試樣消化液的體積,單位為毫升(mL);
100 ———換算係數;
1000———換算係數。
計算結果保留三位有效數字。
精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的5%。
其他
當取樣量0.5g(或0.5mL),定容至100mL時,檢出限為20mg/100g(或20mg/100mL),定量限為60mg/100g(或60mg/100mL)。
釩鉬黃分光光度法
原理
試樣經消解,磷在酸性條件下與釩鉬酸銨生成黃色絡合物釩鉬黃。釩鉬黃的吸光度值與磷的濃度成正比。於440nm 測定試樣溶液中釩鉬黃的吸光度值,與標準系列比較定量。
試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規定的三級水。
試劑
高氯酸(HClO4):優級純。
硝酸(HNO3):優級純。
硫酸(H2SO4):優級純。
鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O]。
偏釩酸銨(NH4VO3)。
氫氧化鈉(NaOH)。
2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚[C6H3OH(NO2)2]。
試劑的配製
釩鉬酸銨試劑:
A 液:稱取25g鉬酸銨,溶於400mL水中。
B液:稱取1.25g偏釩酸銨溶於300mL沸水中,冷卻後加250mL硝酸。將A 液緩慢加至B液中,不斷攪勻,並用水稀釋至1L,混勻,貯於棕色瓶中。
氫氧化鈉溶液(6mol/L):稱取240g氫氧化鈉,溶於1000mL水中,混勻。
氫氧化鈉溶液(0.1mol/L):稱取4g氫氧化鈉,溶於1000mL水中,混勻。
硝酸溶液(0.2mol/L):吸取12.5mL硝酸,用水稀釋至1000mL,混勻。
二硝基酚指示劑(2g/L):稱取0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶於100mL水中,混勻。
標準品
磷酸二氫鉀(KH2PO4,CAS號7778-77-0):純度>99.99%。或經國家認證並授予標準物質證書的一定濃度的磷標準溶液。
標準溶液的製備
磷標準儲備液(50.00mg/L):精確稱取在105 ℃下乾燥至恆量的磷酸二氫鉀0.2197g(精確至0.0001g),溶於400mL水中,移入1L容量瓶,並加水至刻度,混勻。置聚乙烯瓶貯於4℃保存。
儀器和設備
同上。
分析步驟
試樣製備
同上。
試樣前處理
同上。
標準曲線的製作
準確吸取磷標準儲備液0mL、2.50mL、5.00mL、7.50mL、10.0mL、15.0mL於50mL容量瓶中,加入10 mL 釩鉬酸銨試劑,用水定容至刻度。該系列標準溶液中磷的質量濃度分別為0 mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、7.50mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L。在25℃~30℃下顯色15min。用1cm比色杯,以零管作參比,於440nm 測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標,磷的質量濃度為橫坐標,製作標準曲線。
試樣溶液的測定
準確吸取試樣溶液10mL及等量的空白溶液於50mL容量瓶中,加少量水後,加2滴二硝基酚指示劑(2g/L),先用氫氧化鈉溶液(6mol/L)調至黃色,再用硝酸溶液(0.2mol/L)調至無色,最後用氫氧化鈉溶液(0.1mol/L)調至微黃色。加入10mL釩鉬酸銨試劑,用水定容至刻度。於440nm 測定其吸光度值,與標準系列比較定量。
分析結果的表述
試樣中磷的含量按式(2)計算:
食品中磷的測定…………………………(2)
式中:
X ———試樣中磷的含量,單位為毫克每百克或毫克每百毫升(mg/100g或mg/100mL);
ρ ———測定用試樣溶液中磷的質量濃度,單位為毫克每升(mg/L);
ρ0 ———測定用空白溶液中磷的質量濃度,單位為毫克每升(mg/L);
V ———試樣消化液定容體積,單位為毫升(mL);
V2 ———試樣比色液定容體積,單位為毫升(mL);
m ———試樣稱樣量或移取體積,單位為克(g或mL);
V1 ———測定用試樣消化液的體積,單位為毫升(mL);
1000———換算係數;
100 ———換算係數。
計算結果保留三位有效數字。
精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的5%。
其他
當取樣量0.5g(或0.5mL),定容至100mL時,檢出限為20mg/100g(或20mg/100mL),定量限為60mg/100g(或60mg/100mL)。
電感耦合電漿發射光譜法
見GB5009.268。
