雙指示劑甲醛滴定法
(一)原理:胺基酸具有酸、鹼兩重性質,因為胺基酸含有-COOH基顯示酸性,又含有-NH2基顯示鹼性。由於這二個基的相互作用,使胺基酸成為中性的內鹽。當加入甲醛溶液時,-NH2與甲醛結合,其鹼性消失,破壞內鹽的存在,就可用鹼來滴定-COOH基,以間接方法測定胺基酸的量。
(二)試劑
(1)20%中性甲醛溶液,(以百里酚酞為指示劑,用0.1NNaOH溶液滴定呈淡藍色)。
(2)0.1%百里酚酞95%乙醇溶液。
(3)0.1%中性紅50%乙醇溶液。
(4)0.100N氫氧化鈉標準溶液。
(三)操作步驟:
移取一定量(約含20毫克左右的胺基酸)樣品溶液2份,分別置於250毫升錐形瓶中,加水50毫升;其中一份加3滴中性紅指示劑,用0.1OONNaOH溶液滴定至琥珀色為終點。另一份加入中性甲醛10毫升及3滴百里酚酞指示劑,搖勻,靜置1分鐘,(此時藍色應消失)。再用0.1OONNaOH溶液滴定至淡藍色。記錄兩次滴定所消耗的鹼液毫升數,用下述公式計算
計算:
胺基酸態氮(%)=((V1-V2)×N×0.014)×100/W
式中:
N:NaOH標準溶液當量濃渡。
V1:測定樣品消耗NaOH標準溶液的體積(ml)。
V2:測定空白消耗NaOH標準溶液的體積(ml)。
W:樣品溶液相當樣品的質量(克)。
0.014:氮的毫克當量。
注意事項:
測定時樣品的顏色較深,應加活性炭脫色之後再滴定。