銀法染色
套用
銀染的方法種類很多，目前有文獻報導的就有100多種。但是其準確的染色機制還不是特別的清楚。大致的原理是銀離子在鹼性pH環境下被還原成金屬銀，沉澱在蛋白質的表面上而顯色。由於銀染的靈敏度很高，可染出膠上低於1ng/蛋白質點，故廣泛的用在2D凝膠分析上，及極低蛋白含量測定的垂直凝膠中。這裡介紹的是我們實驗室成功運用的銀染方法，對關鍵操作及要求做了補充！主要是用於垂直凝膠電泳中低豐度蛋白的檢測！如內源性GST-Pulldown、Co-IP等實驗中相互作用蛋白的研究。
實驗操作流程
實驗目的：檢測聚丙烯醯胺凝膠中的蛋白質。
1實驗原理：在鹼性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。
試劑：乙醇、冰醋酸、乙酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀、碳酸鈉、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛
實驗操作程式：
固定：30min或者更長時間100ml乙醇40%乙醇
25ml冰醋酸10%冰醋酸
加水到250ml
致敏：30min75ml乙醇30%乙醇
17g乙酸鈉28.2g三水乙酸鈉
0.5g硫代硫酸鈉
加水到終體積250ml
水洗：3x10min
銀染：20min0.625gAgNO3
100ul37%甲醛（在使用前加入）
加水到終體積250ml
水洗：2x1min(注意把握時間，水洗時間長顯色速度慢，點的顏色偏黃色)
顯色：視情況而定6.25gNa2CO3
50ul37%甲醛（在使用前加入）
加水到終體積250ml
終止：10min3.65gEDTA.Na2.2H2O或者1g甘氨酸
加水到終體積250ml
保存：1%冰醋酸，4℃
注意事項：
1．固定時間較長，則加一步水洗30min，以免膠太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配製一份顯色液，第一次顯色到溶液變混濁時換一份顯色液，顯色到點清晰。
4．顯色過程很快，要注意把握時間，避免染色過度。
5．銀染液和顯色液需要預冷。
6．所用器皿要很潔淨，不用手直接接觸，以免雜蛋白污染！
7．清洗用水儘量用高純度去離子水，蒸餾水更佳，可以減少背景著色。
日本卡通片人物
市丸銀×藍染
銀染是指久保帶人的動漫作品《死神》中市丸銀和藍染的配對。
是《死神》中非官方民間衍生的cp。
攻方
市丸銀ichimarugin（いちまるぎん）CV：
游佐浩二
身長：185cm
體重：69kg
誕生日：9月10日
特徵：白膚細目，笑起來像壞人…(他好像一直在笑吧…)
瞳色：漫畫原著中是青藍色（參照漫畫20卷封面），動畫中是殷紅色（參照動畫46集、48集、91集OP）
發色：漫畫中銀色，動畫中淺紫
真央靈術學院畢業時間：一年（被稱為天才）
受方
全名：藍染惣右介(AizenSousuke)
註：“惣”字發音為“zong（第三聲）”
身高：186cm
體重：74kg
生日：5月29日
愛好：讀書
專長：書法
喜歡的食物：豆腐
討厭的食物：煮熟的雞蛋
