酚苷
英文名字:phenolic glycoside是苷元分子中的酚羥基與糖的端基碳原子縮合而成的苷。苯酚苷、萘酚苷、蒽醌苷、香豆素苷、黃酮苷、木脂素苷等屬於酚苷。如熊果苷、天麻苷等。
毛白楊葉中酚苷類成分含量測定方法的研究
毛白楊葉中主要含有酚苷類化學成分。為了充分利用這一豐富的自然資源,我們對植物中的有效成分進行了含量測定方法的研究。1 儀器與試藥
薄層掃瞄器島津CS-930,定量毛細管(Drummond Sci.Co.USA),高效矽膠薄層預製板(煙臺化工研究所),雙槽薄層展開槽(CAMAG 12cm×5cm×12cm),浸板槽(自製 11cm× cm×11cm),超音波清洗器(無錫超聲電子設備廠),離心機80-1型(上海手術器械廠),所用試劑均為分析純。3種對照品水楊苷(salicin,M-1),2?-苯甲醯水楊苷(treuloidin,M-4),特里楊苷(tremulacin,M-5),由中國醫學科學院藥物研究所林茂研究員提供,植物樣品自采。
2 實驗樣品的製備
2.1 供試品溶液:取毛白楊的乾葉粉末(40目篩)約100 mg,精密稱定,置10 mL具塞試管中,精密加入80%甲醇水溶液2 mL,超聲提取30 min,離心5 min,上清液作為供試品溶液。
2.2 對照品溶液:取3種酚苷的對照品,加甲醇溶解,製成1 mg/mL的溶液,作為對照品溶液。
3 實驗條件
3.1 薄層分離條件:固定相為高效矽膠薄層預製板10cm×10cm,以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶1.5∶0.5∶0.05)為展開劑,進行二次展開,每次展開前需飽和30min,展開、取出、吹乾,浸入α萘酚-硫酸試液(15%α萘酚乙醇溶液21mL、濃硫酸13mL、乙醇81mL與水8mL相混合),立即取出,用濾紙吸去過量的試液,置100℃烘約3~5 min至呈桃紅色斑點,取出,在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板,周圍用膠帶密封固定。結果見圖1。 1-M-1;2-M-4;3-M-5;4-樣品溶液
圖1 毛白楊樣品的薄層色譜圖
3.2 掃描條件:單波長反射法線性掃描,光源:鎢燈,λs=520 nm,Sx=3。
4 方法考察
4.1 穩定性實驗:精密吸取對照品溶液點樣於薄層板上,依法展開,顯色,每隔一定時間掃描一次。結果表明,顯色後4 h內峰面積值基本不變,M-1,M-4,M-5的RSD分別為0.96%,1.16%和1.23%。
4.2 精密度實驗:取同一份樣品溶液,在同一塊薄層板上,點同樣量的斑點7個,依法操作進行掃描測定,3種被測物質M-1,M-4,M-5的RSD分別為1.42%,3.32%和2.75%。
4.3 線性關係:精密吸取對照品溶液1,2,3,4,5 μL,點於同一塊薄層板上,依法操作,測定峰面積值。以點樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪製標準曲線,結果:
M-1 Y=1410.7+3668.4X
r=0.9919(0.400~4.000 μg)
M-4 Y=618.9+1567.6X
r=0.9966(0.673~6.735 μg)
M-5 Y=484.3+1093.5X
r=0.?972(0.715.~7.150 μg)
4.4 回收率實驗:精密稱取樣品粉末(過40 目篩)100mg4份,其中3份加入定量的對照品溶液,按供試品溶液製備項下操作,依法展開、顯色、測定,用隨行外標法計算,結果回收率如下:
M-1 98.66%,RSD=1.40%
M-4 98.11%,RSD=3.23%
M-5 98.30%,RSD=2.57%
5 樣品測定
精密稱取不同生長時期的樣品粉末各100 mg,依法測定,結果見表1。
表1 樣品含量測定結果(%)(n=3)
成分 | 採收期(月) | ||||||
5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | |
M-1 | 0.1052 | 0.1309 | 0.4016 | 0.2999 | 0.4516 | 0.5156 | 0.6008 |
M-4 | — | 0.0287 | 0.3589 | 0.2057 | 0.2649 | 0.3974 | 0.4796 |
M-5 | 0.3779 | 1.170 | 2.645 | 2.272 | 2.694 | 2.576 | 3.394 |
結果表明,毛白楊中主要有效成分特里楊苷在植物中的含量比較高,並且在11月時,含量達到最高,這時採收,正值落葉,可以不損害植物的生長。6 結果與討論
6.1 本文建立了毛白楊葉中有效成分的含量測定方法,方法簡便、快速、準確。
6.2 酚苷類均具有紫外吸收,但M-4、M-5的最大吸收為240 nm,而M-1則在278 nm處具有最大吸收,給測定帶來麻煩;但顯色後三者均在520 nm處有最大吸收,且其靈敏度與紫外測定基本一致,故選用顯色後進行可見光測定。
6.3 精密度的測定以樣品溶液的測定結果較為可靠。
6.4 展開後的薄層板採用浸板顯色的方式,可以得到顯色均勻的效果。加蓋玻璃板可以使得斑點穩定時間更長。
6.5 展開劑中的水分對分離具有關鍵的作用,不加水時斑點嚴重拖尾,影響分離,但水量過大則展開劑變混濁。