通過與皰疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重組,提高含綠色螢光蛋白(GFP)基因逆轉錄病毒的感染效率,並使其經受超速離心以達到進一步濃縮.方法套用GFP-RV質粒轉染PT67細胞並用G418篩選出GFP陽性克隆,利用其產生的病毒上清液再轉染GP2-293細胞,在G418篩選的同時,瞬時轉染VSV-G基因.收集該GP2-293細胞產生的重組病毒作滴度測定,並通過低溫超速離心製成含GFP病毒的濃縮液,再感染NIH3T3細胞,觀察GFP在NIH3T3細胞內的表達情況.結果GFP-RV質粒轉染PT67細胞產生的GFP陽性克隆,隨著細胞傳代過程,GFP的表達逐漸減弱.GP2-293細胞轉染VSV-G基因後可產生(7.5±1.4)×l05cfu/mL的GFP重組假病毒,將其濃縮液轉染NIH3T3細胞,可見GFP在細胞內有較強的表達.結論逆轉錄病毒與VSV-G共轉染GP2-293包裝細胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在組織工程中套用範圍更廣泛.
介紹
逆轉錄病毒是典型的反座子，它們能編碼逆轉錄酶和/或整合酶，因此能進行轉座。轉座子和逆轉錄病毒的區別在於轉座子不能獨立地感染其它細胞，但轉座機制基本相似。這類番座子被稱為病毒超家族(Viralsuperfamily)。另一類反座子是有獨特的外部和內部特徵，它們都來源於RNA序列，雖然我們只能推測其DNA拷貝的產生機制，但可以推測它們是某些其它系統的酶催化的轉座靶序列，可能源於細胞轉錄。這類轉座子並不編碼有轉座功能的蛋白質，稱為非病毒超家族(Nonviralsuperfamily)。
哺乳動物基因組含有很多相對短但彼此相關的序列，其重要部分包含轉座子。大部分可歸納為兩個家族，即長散布重複序列(LINES)和短散布重複序列(SINES)。這些成分當初曾被認為是一些分散重複序列：每個家族都包含許多成員分散在基因組中。LINES和SINES的一個更重要的區別是，LINES是RNA聚合酶Ⅱ的轉錄物，而SINES則是RNA聚合酶Ⅲ的轉錄物。
哺乳動物基因組包含20,000~0,000拷貝的LINES，稱為L1。其典型結構大約6500bp長，末端富含A，內部可能存在開放讀框。例如，一個已經被測序的元件有兩個開放讀框，分別為1137bp和3900bp，二者有14個bp重疊。已經發現它們能夠被轉錄。就像在重複DNA中一樣，LINES家族的每個成員都有所不同。但在一個物種中的家族成員比種系間表現出更大的同源性。業已證明，活性Ty元件具有轉座活性。我們認為果蠅基因組中的copia序列可能也同樣具有轉座活性。
LINES元件和其它一些成員無LTR，LTR是逆轉錄病毒的典型結構。這就提出了一個問題:它們的逆轉錄是怎樣進行的呢？它們不包括典型的tRNA引物與LTR的配對過程。這些元件中不存在涉及逆轉錄作用的開放讀框，如編碼蛋白質酶或者整合酶，但卻含有類逆轉錄酶編碼序列，其產物可能有內切核酸酶活性。
