前言
為了觀察生物體的微細結構,電子顯微鏡所用的超薄切片, 需要經過了解取材的基本要求,取材和製備超薄切片的過程, 即為透射電鏡 標本(超薄切片)的製備 。
取材的基本要求
組織從生物活體取下以後,如果不立即進行適當處理,會由於細胞內部各種酶的作用,出現細胞自溶現象。此外,還可能由於污染,微生物在組織內繁殖使細胞的微細結構遭受破壞。因此,為了使細胞結構儘可能保持生前狀態,必須做到快、小、準、冷:
(1).動作迅速,組織從活體取下後應在最短時間內 (爭取在1分鐘內) 投入2.5%戊二醛固定液。
(2).所取組織的體積要小,一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形。因
為固定劑的滲透能力較弱,組織塊如果太大,塊的內部將不能得到良好的固定。
(3).機械損傷要小,解剖器械應鋒利,操作宜輕,避免牽拉、挫傷與擠壓。
(4).操作最好在低溫(0℃~4℃)下進行,以降低酶的活性,防止細胞自溶。
(5).取材部位要準確。
取材
將取出的組織放在潔淨的蠟版上,滴一滴預冷的固定液,用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下並修小,然後用牙籤或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液,應先用固定液洗幾遍,然後再切成小塊固定。
超薄切片的製備
製備超薄切片的設備為超薄切片機,使用的刀為玻璃刀或鑽石刀。為了能切成薄片,包埋標本的包埋劑一定要達到一定的硬度,通常是用樹脂聚合包埋。
方法與步驟:鋨酸和戊二醛固定樣品->丙酮逐級脫水->環氧樹脂包埋_>以熱膨脹或機械伸縮的方式切片_>重金屬(鈾,鉛)鹽染色.