變性沉澱法

變性沉澱法的概念及方法類型。

概念

當蛋白質受到外界因素作用時，蛋白質分子結構從有規則的排列變成不規則排列，其物理性質也發生改變，並失去原有的生理活性，即蛋白質發生變性，變性蛋白質在水中的溶解度較小且以沉澱的形式從溶液中析出。利用蛋白質的變性作用，除去混合液中雜蛋白的方法，稱為變性沉澱法。

方法

(一)加熱

利用蛋白質等生物大分子對熱的穩定性不同，加熱破壞某些組分，而保存另一些組分，如脫氧核糖核酸酶對熱的穩定性較核糖核酸酶差，加熱處理可使混雜在核糖核酸酶中的脫氧核糖核酸酶變性而沉澱；又如以黑麴黴發酵製備脂肪酶時，常混雜有大量澱粉酶，當把混合酶在40℃水中保溫2．5h(pH＝3．4)時，則90％以上的澱粉酶受熱變性而沉澱。加熱處理的方法只適用於對熱較穩定的目的藥物成分，如灰黃霉素(可加熱至80～90℃)、抗敵素(又稱多黏菌素E)(可加熱至90℃左右)等。加熱不僅可使蛋白質變性凝固，還可改變流體的流動特性，利於固液分離，但要嚴格控制加熱溫度和時間。加熱變性沉澱法的優點在於操作簡便、原材料消耗較低，但是，若直接通人蒸汽加熱，產生的冷凝水可使混合液體積增大，而且不能用於熱敏性藥物(如青黴素)的預處理。

(二)加入化學試劑

金屬鹽、表面活性劑、某些有機酸、酚、鹵代烷等可使混合液中的蛋白質或部分蛋白質發生變性而沉澱，使之與目的產物分離，如製取核酸時用氯仿將蛋白質沉澱分離。

(三)調節pH值

當溶液的酸鹼性發生劇烈變化時，可引起蛋白質的變性而沉澱，如用濃度為2．5％的三氯乙酸處理含胰蛋白酶、抑肽酶或細胞色素C的溶液，均可除去大量雜蛋白，而對所提取的酶活性沒有影響。也可先用酸調pH值後，再用鹼調，或在較寬的pH值範圍內酸鹼變性結合使用，效果更為顯著。