原理
等電點沉澱法在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子淨電荷為零(即正負電荷相等)，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉澱，所以蛋白質在等電點時，其溶解度最小，最易形成沉澱物。等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小，從而有利於懸浮液的過濾。
注意
1．不同的蛋白質，具有不同的等電點。在生產過程中應根據分離要求，除去目的產物之外的雜蛋白；若目的產物也是蛋白質，且等電點較高時，可先除去低於等電點的雜蛋白，如細胞色素C的等電點為10．7，在細胞色素C的提取純化過程中，調pH＝6．0除去酸性蛋白，調pH＝7．5～8．0，除去鹼性蛋白。 2．同一種蛋白質在不同條件下，等電點不同。在鹽溶液中，蛋白質若結合較多的陽離子，則等電點的pH值升高；因為結合陽離子後，正電荷相對增多，只有pH值升高才能達到等電點狀態，如胰島素在水溶液中的等電點為5．3，在含一定濃鋅鹽的水—丙酮溶液中的等電點為6；如果改變鋅鹽的濃度，等電點也會改變。蛋白質若結合較多的陰離子(如C1-、SO42-等)，則等電點移向較低的pH值，因為負電荷相對增多了，只有降低pH值才能達到等電點狀態。 3．目的藥物成分對pH值的要求。生產中應儘可能避免直接用強酸或強鹼調節pH值，以免局部過酸或過鹼，而引起目的藥物成分蛋白或酶的變性。另外，調節pH值所用的酸或鹼應與原溶液中的鹽或即將加入的鹽相適應，如溶液中含硫酸銨時，可用硫酸或氨水調pH值，如原溶液中含有氯化鈉時，可用鹽酸或氫氧化鈉調pH值。總之，應以儘量不增加新物質為原則。 4．由於各種蛋白質在等電點時，仍存在一定的溶解度，使沉澱不完全，而多數蛋白質的等電點又都十分接近，因此當單獨使用等點電沉澱法效果不理想時，可以考慮採用幾種方法結合來實現沉澱分離。
