電泳
電泳是指帶微量電荷的基團在通電的情況下,向不同的電極運動。這一般用於區分膠體。當然,膠體必須帶電。比如Fe(OH)3的膠體就有電泳現象。
原理與實驗
分離過程在由膜隔開的多通道電泳槽中進行,電場方向與各腔室中的溶液流動方向垂直。帶不同電荷的蛋白質混合物進入進樣室,帶電的目標組分在電場作用下遷移進入介質室,被親和介質吸附。帶電性質與目標組分相近的雜質蛋白在電場作用下通過介質室,繼續遷移進入沖洗室並被沖洗溶液帶出;而帶電性質與目標組分相反的雜質蛋白質在電場作用下直接遷移進入另一側的沖洗室,然後被沖洗液帶出,減少了雜質蛋白質在介質中的非特異性吸附,從而提高了分離過程的選擇性。吸附完成後,引入洗脫緩衝溶液,在電場作用下將目標組分從介質上洗脫下來,並遷移入沖洗室被衝出,完成分離過程。
裝置
裝置為6腔室結構的電泳槽,各腔室間用膜隔開,如圖2所示。電極室與沖洗室之間用自行合成的lmm厚的凝膠膜
8隔開;沖洗室、介質室及進樣室之間用HT Tuffryn 450膜隔開。各腔室的長度均為12cm,寬度增為12cm,陽極室、陰極室、陽極沖洗室、陰極沖洗室、進樣室和介質室的厚度分別為4.0、4.0、3.0、4.0、3.0和4.5mm。採用鉑絲作為電泳槽的陽極和陰極。實驗方法
實驗時,首先用泵將吸附緩衝溶液連續輸入電極室、沖洗室和進樣室,然後開啟電泳儀電源。當親和介質與吸附緩衝溶液達到平衡後,將含蛋白質的樣品緩衝溶液泵入進樣室,開始電泳吸附。電泳吸附過程持續約60min後,進行15min左右的電泳淋洗。之後關閉電泳儀電源,將緩衝溶液更換為洗脫緩衝溶液,再打開電泳儀電源,進行電泳洗脫。實驗結束後,用6moL/L尿素再生介質。