藥物敏感試驗的方法
目前常用的藥敏試驗方法有：紙片瓊脂擴散法（K-B法）、稀釋法、E試驗、檢測細菌耐藥性的方法。稀釋法分液體稀釋法和瓊脂稀釋法。檢測細菌耐藥性的方法包括 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的檢測、耐萬古黴素腸球菌（VER）的檢測、耐青黴素肺炎鏈球菌（PRP）的檢測、超廣譜 β-內醯胺酶（ESBL）的檢測和β-內醯胺酶的檢測。
實驗步驟
實驗材料
1.1普通營養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買，做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養基，如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門氏菌可選擇血清培養基。
1.2藥敏試紙：購買或自製（詳見實驗準備）
1.3細菌：待做藥敏試驗的細菌
1.4接種環、 酒精燈、打孔器、 牛津杯
1.5移液器、 滴頭
實驗準備
2.1藥敏片的準備：購買或自製
2.1.1藥敏片的製備：取新華1號定性濾紙，用 打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中，瓶口以單層 牛皮紙包紮。經15磅15-20分鐘高壓消毒後，放在37℃溫箱或 烘箱中數天，使完全乾燥。
2.2.2抗菌藥紙片製作：在上述含有50片紙片的青黴素瓶內加入藥液0.25毫升，並翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，乾燥後即密蓋，如有條件可 真空乾燥。切勿受潮，置陰暗乾燥處存放，有效期3-6個月。各種常用藥的藥液配製詳見表-2
2.2藥液的製備（用於商品藥的試驗）：按商品藥的使用治療量的比例配製藥液；如商品藥百病消按其說明量治療量0.01%飲水，可按這個比例配製藥液，可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用於做藥敏試驗的藥液。
實驗操作方法
3.1藥敏片法
3.1.1在“ 超淨台”中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量 細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布 於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌 混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密）
3.1.2將鑷子於酒精燈火焰滅菌後略停，取藥敏片貼到平皿培養基表面。為了使藥敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果，要求藥敏片能有規律的分布於平皿培養基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），每種藥敏片的名稱要記住。
3.1.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.2 牛津杯法
3.2.1在“超淨台”中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密）
3.2.2以 無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，並在小管處標記各種藥物名稱。每個平板可放4-6支小管。待分鐘後，分別向各小管中滴加一定數量的各種藥液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時，觀察結果。
3.2.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.3打孔法：該法較簡單，成本低，易操作，比較適用於商品藥物的檢測。
3.3.1在“超淨台”中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密）
3.3.2以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將 孔中的培養基用針頭挑出，並以火焰 封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結果）。
3.3.3加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
結果觀察
在塗有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內的細菌生長受到抑制。過夜培養後形成一個 抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細菌濃度有直接關係。
判定標準
1.藥敏實驗的結果，應按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標準。
表—1藥物敏感實驗判定標準
抑菌圈直徑（毫米）敏感度
20以上極敏
15—20 高敏
10—14中敏
10以下低敏
0不敏
2.藥物敏感實驗判定標準參考表—1， 多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上為高敏，6—9毫米為低敏，無抑菌圈為不敏。
影響藥敏結果的因素
培養基
應根據試驗菌的營養需要進行配製。傾注平板時，厚度合適（約5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的 培養皿，傾注培養基18-20ml為宜。培養基內應儘量避免有抗菌藥物的拮抗物質，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的 抗菌活性， 胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸（PABA）能拮抗 磺胺藥和 TMP的活性。
細菌接種量
細菌接種量應恆定，如太多，抑菌圈變小，能產酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。
藥物濃度
藥物的濃度和總量直接影響 抑菌試驗的結果，需精確配製。商品藥應嚴格按照其推薦治療量配製。
培養時間
一般培養溫度和時間為37℃8-18小時，有些抗菌藥擴散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養基，先置4℃冰櫃內2-4小時，使抗菌藥預擴散，然後再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長，而得到較大的抑菌圈。
套用
藥物敏感實驗後，應選擇高敏藥物進行治療，也可選用兩種藥物協助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時應考慮藥物的吸收途徑，因為我們藥敏實驗是藥液直接和細菌接觸，而在給禽用藥的時候，必須通過機體的吸收才能使藥物達到一定的效果，所以在給禽用藥時，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會達到好的治療效果。
