胸腺肽溶液藥物介紹
色譜【英文名】Thymopolypeptides Solution
【書頁號】D16-118
【標準編號】WS1-XG-042-2000-2003
【性狀】藥品為無色或微黃色液體。
【鑑別】(1)取藥品，加40%氫氧化鈉溶液0.5ml，搖勻，再加1%硫酸銅溶液1ml，溶液顯紫紅色。(2)取藥品，加水製成每1ml中含多肽20μg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄Ⅳ A)測定，在(251±3)nm(豬胸腺)或(260±3)nm(牛胸腺)的波長處有最大吸收。
【檢查】pH值：應為6.0-7.5(中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ H)。蛋白質：取藥品2ml，加20%磺基水楊酸溶液1ml，混勻，不得發生渾濁或沉澱。高分子量物質：照高效液相色譜法測定(中國藥典2000年版二部附錄Ⅴ D)。色譜條件與系統適用性試驗：用凝膠色譜柱(如 TSK GEL 2000SWxl 7.8mm×300mm，5μm)；以三氟醋酸-乙腈-水(0.05:10:90)為流動相；流速為每分鐘0.7ml檢測波長為214nm。理論板數按核糖核酸酶A計算應不得低於5000，分離度按相鄰峰高與峰谷之比計算均不得小於3.0。標準曲線的製備：分別取核糖核酸酶A(分子量13700)、胰島素(分子量5808)、胸腺肽α1(分子量3108)、生長激素釋放抑制因子(分子量1521)適量，用流動相製成每1ml中各含1mg的溶液作為分子量標準溶液。分別取分子量標準溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重複進樣，其保留時間相對偏差不得大於2.0%。以各峰的保留時間為橫坐標，分子量對數為縱坐標作標準曲線，進行線性回歸，相關係數不得小於0.99。測定法：取供試品適量，加流動相製成每1ml中含多肽1mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以面積歸一化法計算，供試品中分子量大於10000道爾頓的組分不得過5.0%。胸腺肽α1 在高分子量物質項下記錄的色譜圖中，按面積歸一化法計算，供試品中對應於胸腺肽α1的保留時間的峰的含量不得低於1.0%。活性測定：取藥品適量，照T細胞活性測定法—脫E受體法(附一)測定，供試品管的E玫瑰花結百分率與對照管的E玫瑰花結百分率之差應不得低於10.0%。
【含量測定】取藥品適量，加水製成每1ml中含多肽0.15mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取1.0ml，照福林酚測定法(附二)測定，從回歸方程中求出多肽含量。
【類別】免疫調節藥。
【貯藏】密閉，4℃以下保存。
【製劑】(1)胸腺肽注射液 (2)注射用胸腺肽
【有效期】1.5年
化學檢測
福林酚本法系根據胸腺肽可使脫E受體後的胸腺T細胞恢復其E受體功能，從而反映胸腺肽的生物活性。試劑 (1)Hank’s液將0.3%磷酸二氫鉀溶液，0.76%磷酸氫二鈉溶液，2%氯化鉀溶液及20%氯化鈉溶液依次按20:20:20:40比例混合，加葡萄糖1g，溶解混勻，用水稀釋至1000ml，並用4%碳酸氫鈉溶液調節pH值至7.2-7.3(臨用時配製)。(2)阿氏液 取氯化鈉0.420g，枸櫞酸0.055g，枸櫞酸鈉0.766g，葡萄糖2.05g，加水溶解並稀釋至100ml，滅菌。(3)分離液為淋巴細胞分離液。(4)羊血 取綿羊靜脈血5ml，加入5ml阿氏液中，冰櫃保存。(5)固定液 取25%戊二醛溶液，3.5%碳酸氫鈉溶液及Hank’s液依次按1:1:38比例混合。(6)姬姆薩染色液原液 取姬姆薩染料0.5g，加甘油33ml，55-60℃加熱至姬姆薩染料溶解，冷至室溫，加入33ml甲醇，室溫放置24小時後，用濾紙過濾，濾液即為原液。密封室溫保存。(7)染色液 取姬姆薩染色液原液2ml，加Hank’s液6ml，搖勻，以每分鐘1500轉離心10分鐘，取上清液待用。操作法 (1)脫E受體胸腺T細胞懸液的製備 取新鮮豬胸腺，去脂肪並剪碎，加適量Hank’s液使成細胞懸液，經100目篩過濾，每分鐘1500轉離心3-5分鐘，棄去上清液，加入少量Hank’s液打勻，將此溶液加入已具有1/3濾液量的分離液的離心管中，以每分鐘2000轉離心20分鐘，小心吸出中間層的胸腺細胞，放入另一離心管中，加適量Hank’s液洗滌，搖勻，以每分鐘1500轉離心3-5分鐘，棄去上清液，洗滌一次後，在沉澱物中加入適量Hank’s液，混勻，45℃恆溫水浴保溫30分鐘(每隔5分鐘振搖一次)。以每分鐘1500轉離心3-5分鐘，棄去上清液，再加入適量Hank’s液，混勻後，置45℃恆溫水浴保溫30分鐘，取出後以每分鐘1500轉離心3-5分鐘，棄去上清液。用Hank’s液洗滌三次(操作同前)，最後用Hank’s液適當稀釋並計數，使最終濃度為每1ml中(3×10)-(5×10)個細胞。(2)綿羊紅血球懸液的製備 取適量羊血，用適量Hank’s液洗三次(同前)。棄去上清液，加適量Hank’s液稀釋並計數，使最終濃度為脫E受體胸腺T細胞懸液濃度的8-10倍。(3)供試品溶液的製備 取供試品，用Hank’s液配製成每1ml中約含0.2-1mg的溶液。(4)測定 取小試管6支，其中3支各加Hank’s液0.1ml作對照管，另3支各加供試品溶液0.1ml作測定管，每管中各加脫E受體胸腺T細胞懸液0.2ml，37℃保溫1小時後，加入綿羊紅血球懸液0.2ml，搖勻，以每分鐘500轉離心3分鐘，放入4℃冰櫃過夜，次日取出，棄去上清液，每管中各加入固定液一滴，輕輕搖勻，靜置10分鐘，加入染色液2滴並搖勻，靜置15分鐘後開始計數，顯微鏡視野中淡藍色的較大的細胞為淋巴細胞，共數計數板16個大方格上所有淋巴細胞的個數(不少於200個)，統計其中的E玫瑰花結形成的細胞數(結合3個以上綿羊紅細胞的淋巴細胞)，求得結花百分率，取平均值。即為供試品管或對照管的平均值。樣品活力＝供試品測定管E玫瑰花結百分率－對照管E玫瑰花結百分率。
福林酚測定法
試劑 鹼性銅試液 取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30ml使溶解，將兩液混合，作為乙液。臨用前，合併兩液，並加水至500ml。操作法 (1)對照品溶液的製備取牛血清白蛋白對照品，加水製成每1ml中含0.3mg的溶液。(2)供試品溶液的製備 照各藥品項下的方法製備。(3)標準曲線的製備 精密量取對照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入鹼性銅試液1.0ml，搖勻，各加入福林酚試液(取福林試液中的貯備液1→16)4.0ml，立即混勻，置55℃水浴中準確反應5分鐘，置冷水浴中10分鐘，在650nm的波長處測定吸收度；同時以0號管作為空白。以吸收度為縱坐標，對照品溶液濃度為橫坐標繪製標準曲線。(4)測定法 精密量取供試品溶液1.0ml，照標準曲線的製備項下的方法，自“加入鹼性銅試液”起，依法測定，自標準曲線上查得供試品溶液的濃度，並乘以稀釋倍數。
過敏試驗法
本法系將一定劑量的供試品溶液注入豚鼠腹腔和靜脈，在規定的時間內觀察動物的過敏反應情況，以判定供試品是否符合規定的一種方法。供試動物 健康豚鼠，雌雄均可，體重250-350g，試驗前及試驗的觀察期內，均應按正常飼養條件飼養，做過本試驗的動物不得重複使用。供試溶液的配製 除另有規定外，用氯化鈉注射液按各藥品項下規定濃度製成供試品溶液。檢查法 取上述豚鼠6隻，間日腹腔注射供試品溶液0.5ml，連續3次，然後分成兩組，每組3隻，分別在第一次注射後第14日及第21日靜脈注射供試品溶液1.0ml。結果判斷 靜脈注射後15分鐘內均不得出現過敏性反應，如有豎毛、呼吸困難、噴嚏、乾嘔或咳嗽3聲等現象中的兩種以上者；或{羅}音、抽搐、虛脫或死亡現象之一者應判為陽性。
