基本信息
肝淨注射液拼音名:Ganjing Zhusheye
英文名：書頁號:GLG─179
標準編號：WS-10099(ZD-0099)-2002
【處方】 茵陳214g 梔子214g 板藍根214g 膽汁膏20g 大黃43g 黃芩214g 聚山梨酯80 10ml
製成 1000ml
【性狀】 本品為棕色或棕紅色的澄明液體。
鑑別
(1)取本品20ml，蒸十，殘渣加O．2%氫氧化鈉甲醇溶液2ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點丁同一含4%醋酸鈉以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。 (2)取本品20ml，蒸乾，殘渣加丙酮2ml，超聲處理使溶解，取上清液作為供試晶溶液。另取梔子苷對照品，加丙酮製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照溥層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述供試品溶液5μl、對照品溶液2μ l，分別點於同一矽膠G薄層板卜，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(6:4:0.5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾乾噴以5%香早醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。 (3)取本品20ml，用醋酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取茵陳對照藥材1.5g，加水30ml，加熱回流1小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液。照薄層色曙法(中國藥典2000年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液10μl、對照藥材溶液5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(6:4:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，在100℃加熱5～10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的監色螢光斑點。檢查
pH值 應為5.0～7.0(中國藥典2000年版一部附錄Ⅵ G)。 蛋白質 取本品1ml，加鞣酸試液1～3滴，混合，放置5分鐘，不得出現渾濁。 樹脂 取本品5ml，置分液漏斗中，加氯仿10ml，振搖提取，依法測定(中國藥典2000年版一部附錄Ⅸ S)，應符合規定 其他 應符合注射劑項下有關的各項規定(中國藥典2000年版一部附錄Ⅰ U)含量測定
照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄ⅥD)測定。 色譜條件及系統適用性試驗 用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；乙腈-水(12:88)為流動相；檢測波長為240nm。理論板數按梔子苷峰計算應不低於1500。 ． 對照品溶液的製備精密稱取梔子苷對照品約10mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻。冉精密吸取卜述溶液5ml，置50ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml溶液含梔子苷40μg)。 供試品溶液的製備 精密吸取本品2ml．置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密吸取續濾液15ml，置25ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液，即得。 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。 本品每1ml含梔子以梔子苷(C17H24O10)計，不得少於1.0mg。主治及用法
【功能主治】 清熱，利濕，解毒。用於急性肝炎，慢性肝炎屬肝膽濕熱證者。【用法用量】 肌內注射， 一次2～4ml，一日2次。
【禁忌】 孕婦禁用。
【規格】 每支裝2ml
【貯藏】 密封，黃陰涼處。
【有效期】 1.5年。
製劑學研究
肝淨注射液的指紋圖譜研究1. 建立肝淨注射液的HPLC-UV指紋圖譜,獲得對照圖譜,為全面控制肝淨注射液的質量提供新的依據。 方法:(1)提取:比較不同提取方法、提取溶劑及提取時間的提取效果,選擇提取成分較多,提取率較高的提取條件。(2)色譜條件:選用合適的色譜柱及檢測波長,調整流動相的組成、配比、流速,調節柱溫,使色譜圖符合指紋圖譜研究要求。(3)系統適用性試驗:在已確定的色譜條件下,考察指紋圖譜中黃芩苷峰的分離度和理論板數。(4)專屬性試驗:精密吸取陰性溶液、供試品溶液及對照品溶液各10μl,注入液相色譜儀,記錄130min內的色譜圖。(5)精密度試驗:取同一份供試品溶液,重複進樣5次,比較所得指紋圖譜的相似度。(6)重複性試驗:取同一批肝淨注射液6份,平行製備供試品溶液,進樣,比較所得指紋圖譜的相似度。(7)穩定性試驗:取供試品溶液分別於0,2.5,5,7.5,12,24h進樣,比較所得指紋圖譜的相似度。(8)指紋圖譜的建立:分別取肝淨注射液5批,製備供試品溶液,進行指紋圖譜分析。 結果:(1)提取:取肝淨注射液1支,用0.45μm濾膜濾過後作供試液。(2)色譜條件:色譜柱:Shimadzu(Shim-pack VP-ODS)柱(4.6mm×150mm,5μm);柱溫:25±0.15℃;流速:1ml/min;檢測波長254nm;進樣量:10μl。(3)系統適用性試驗:按黃芩苷峰計算理論板數約為150000,與其它色譜峰的分離度大於1.5。(4)專屬性試驗:空白溶劑(甲醇)對測定無干擾,黃芩苷對照峰與供試品溶液圖譜的26號峰(71.98min)相對應。(5)精密度試驗:相似度均高於0.98,符合指紋圖譜測定要求,精密度良好。(6)重複性試驗:相似度均高於0.96,符合指紋圖譜測定要求,重複性良好。(7)穩定性試驗:相似度均高於0.98,符合指紋圖譜測定要求,穩定性良好。(8)指紋圖譜的建立:得到肝淨注射液的指紋圖譜。(9)數據分析:利用2004A版相似度軟體進行分析,相似度在0.9～1.00為正品肝淨注射液,品質較優。 結論:本文首次建立了肝淨注射液的指紋圖譜,得到其對照圖譜,利用相似度分析對不同批次肝淨注射液間的差異進行了研究,對肝淨注射液的質量進行了綜合評價,方法重複性和精密度良好,能簡便快速地鑑別和區分偽品,有助於肝淨注射液的標準化生產和質量控制。
2.1 大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的乾燥根及根莖。其性味苦,寒。歸脾、胃、大腸、肝、心包經。瀉熱通腸,涼血解毒,逐瘀通經。用於實熱便秘,積滯腹痛,瀉痢不爽,濕熱黃疸,血熱吐衄,目赤,咽腫,腸癰腹痛,癰腫疔瘡,瘀血經閉,跌扑損傷,外治水火燙傷;上消化道出血。酒大黃善清上焦血分熱毒。用於目赤咽腫,齒齦腫痛。熟大黃瀉下力緩,瀉火解毒。用於火毒瘡瘍。大黃炭涼血化瘀止血。用於血熱有瘀出血症。大黃的乾燥根根莖中含大量蒽醌衍生物,現代藥理研究表明大黃酸(rhein),蘆薈大黃素(aloe-emodin),大黃素(emodin),大黃素甲醚(physcion),大黃酚(chrysophanol)為其主要活性成分。 目的:建立肝淨注射液中大黃的薄層色譜鑑別項,為科學評價與有效控制肝淨注射液質量提供新方法。 方法:(1)提取:比較了不同提取方法不同的提取溶劑的提取效果,選擇提取成分較多,提取率較高的提取條件。(2)色譜條件:選用合適的薄層色譜板和檢視方法,調整展開劑的組成、配比,使色譜圖符合薄層色譜研究的要求。(3)專屬性試驗:分別將陰性溶液、供試品溶液及對照品溶液各5μl點於薄層板進行展開。 結果:(1)提取:最佳提取條件為精密吸取注射液15ml,加HCl2ml,氯仿10ml,水浴加熱回流1小時,放冷,移至分液漏斗,氯仿5ml洗三角瓶,取水層,再加氯仿15ml萃取2次,合併,低溫蒸乾,甲醇1ml溶解。(2)色譜條件:薄層板選用以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G板;展開劑:石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1 )上層;檢視方法:晾乾後置365nm下觀察;點樣量:對照品與供試品均為5μl。(3)專屬性試驗:陰性溶液對測定無干擾,大黃對照藥材的主斑點與供試品溶液圖譜的主斑點相對應。 結論:本文建立了肝淨注射液中大黃的薄層鑑別方法,能簡便、快速地對肝淨注射液中大黃進行鑑別,有助於肝淨注射液的標準化生產及質量控制。
2.2 膽汁膏為豬科動物豬Sus scrofa domestica Brisson.膽汁的濃縮品。其性味苦,寒。歸肝、膽、肺、大腸經。豬膽汁中主要成分為膽汁酸類,膽色素、粘蛋白、脂類及無機物等。膽汁酸中有鵝脫氧膽酸(chenodeoxycholic acid)、3a-羥基- 6-氧- 5α-膽烷酸(3α- hydroxy-6- oxo-5α-cholanic acid)和石膽酸(llthocholic acid),它們幾乎完全與甘氨酸結合而存在。另含豬膽酸(hyocholic acid),豬去氧膽酸(hyodeoxycholic acid),3β,6α-二羥基膽烷酸(3β,6α-dihydroxycholanic acid)。具有清熱,潤燥,解毒,止咳平喘的功效。用於熱病燥渴,目赤,喉痹,黃疸,百日咳,哮喘,泄瀉,痢疾,便秘,癰瘡腫毒。 目的:建立肝淨注射液中膽汁膏的薄層鑑別方法,為全面控制肝淨注射液的質量提供新的依據。 方法:(1)提取:比較了不同提取方法、提取溶劑的提取效果,選擇提取成分較多,提取率較高的提取條件。(2)色譜條件:選用合適的薄層色譜板和檢視方法,調整展開劑的組成、配比,使色譜圖符合薄層色譜研究的要求。(3)專屬性試驗:分別將陰性溶液、供試品溶液及對照品溶液各5μl點於薄層板進行展開。 結果:(1)提取:取2ml注射液,加入2ml 40%NaOH裝入氣相小瓶封蓋後置於120℃烘箱加熱2小時,放冷,調pH至2-3,搖勻,離心,上清液用乙酸乙酯振搖提取3次,每次20ml,,合併乙酸乙酯液,蒸乾,殘渣用乙醇2ml溶解。(2)色譜條件:薄層板選用以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G板;展開劑:異辛烷—乙醚—冰醋酸—正丁醇—水(10:5:5:3:1)的上層溶液;點樣量:對照品與供試品均為5μl。(3)專屬性試驗:陰性溶液對測定無干擾,供試品溶液圖譜的斑點與膽酸和豬取氧膽酸對照品的斑點相對應。 結論:本文建立了肝淨注射液中膽汁膏的薄層鑑別方法,能簡便、快速地對肝淨注射液中膽汁膏進行鑑別,有助於肝淨注射液的標準化生產及質量控制。
2.3綠原酸(chlorogenic acid,CA )是一種多酚類化合物,由一分子咖啡酸和一分子奎尼酸縮合脫水而成,是植物界廣泛存在的一類次生物質,綠原酸用途廣泛,研究表明,綠原酸具有抗菌活性。 目的:建立肝淨注射液中綠原酸的含量測定方法,為有效地控制肝淨注射液中茵陳的質量提供新的依據。 方法:(1)色譜條件:選用合適的色譜柱,調整流動相,流速,調節柱溫,使色譜圖符合液相色譜研究的要求。(2)專屬性試驗:精密吸取對照品溶液3μl、供試品溶液及陰性溶液各10μl,注入液相色譜儀,記錄20min色譜圖。(3)系統適應性試驗:在已確定的色譜條件下,考察圖譜中綠原酸的分離度(4)線性試驗:取綠原酸對照品溶液,分別進樣1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,測定峰面積,以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪製標準曲線。(5)重複性試驗:取同一批肝淨注射液5份,平行製備供試品溶液,進樣,記錄保留時間和峰面積。(6)穩定性試驗:取供試品溶液分別於0,2,4, 12,24 h進樣,記錄保留時間和峰面積。(7)範圍:製備最高限和最低限濃度的供試品溶液各3份;進樣測定,記錄保留時間和峰面積。(8)加樣回收率試驗 結果:(1)色譜條件:色譜柱:SHISEIDO ODS柱(4.6mm×150mm,5μm);柱溫:25?C;流速:1.0ml/min;流動相:乙腈-0.1%磷酸(10∶90);檢測波長:327nm。(2):專屬性試驗:分別精密吸取綠原酸對照品溶液3μl、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μl,在以確定的色譜條件下進樣測定,供試品色譜中在與綠原酸對照品色譜峰保留時間一致處有相應的色譜峰,陰性對照色譜在綠原酸峰保留時間一致處無色譜峰。(3)系統適應性試驗:按綠原酸峰計算理論板數約為6700,綠原酸與相鄰雜質峰的分離度為2.65 ( 1.5),達到良好分離。(4)線性試驗:取綠原酸對照品溶液,分別進樣1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,測定峰面積,以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪製標準曲線。結果回歸方程為:Y=3485730.91X +7622.40,r=0.9999,表明綠原酸在0.0899～2.2475μg範圍內與呈良好的線性關係。(5)重複性試驗:取同一批樣品,製備供試品溶液6份,進樣測定,結果平均含量為0.2708 mg·ml-1,RSD為1.87%(n=6),表明該方法重複性良好。(6)穩定性試驗:精密吸取同一份供試品溶液,分別在1h,2h,4h,12h,24h進樣測定峰面積,結果RSD%=0.28%(n=5),表明樣品在24h內穩定。(7)範圍:製備最高限和最低限濃度的供試品溶液各3份;進樣測定,結果平均含量為0.2689mg·ml-1,RSD為1.07%。(8)加樣回收率試驗:綠原酸平均回收率為99.24%,RSD%為1.87%(n=6)。 結論:本文建立了測定肝淨注射液中綠原酸含量的高效液相色譜方法,方法重複性和精密度良好,有助於肝淨注射液的標準化生產和質量控制。
2.4黃芩苷(Baicalin)為唇形科植物黃芩Suutellaria baicalensis.Georgi的乾燥根提取分離出來的一種黃酮類化合物,具有顯著的生物活性,具有抑菌、利尿、抗炎、抗變態及解痙作用,並且具有較強的抗癌反應等生理效能。具有瀉實火,除濕熱,止血,安胎。治壯熱煩渴,肺熱咳嗽,濕熱瀉痢,黃疸,熱淋,吐、衄、崩、漏,目赤腫痛,胎動不安,癰腫疔瘡。 目的:建立肝淨注射液中黃芩苷的含量測定方法,為有效地控制肝淨注射液中茵陳的質量提供新的依據。 方法:(1)色譜條件:選用合適的色譜柱,調整流動相,流速,調節柱溫,使色譜圖符合液相色譜研究的要求。(2)專屬性試驗:精密吸取對照品溶液3μl、供試品溶液及陰性溶液各10μl,注入液相色譜儀,記錄20min色譜圖。(3)系統適應性試驗:在已確定的色譜條件下,考察圖譜中黃芩苷的分離度。(4)線性試驗:取黃芩苷對照品溶液,分別進樣1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,測定峰面積,以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪製標準曲線。(5)重複性試驗:取同一批肝淨注射液5份,平行製備供試品溶液,進樣,記錄保留時間和峰面積。(6)穩定性試驗:取供試品溶液分別於0,2,4,12,24 h進樣,記錄保留時間和峰面積。(7)範圍:製備最高限和最低限濃度的供試品溶液各3份;進樣測定,記錄保留時間和峰面積。(8)加樣回收率試驗。 結果:(1)色譜條件:色譜柱:SHISEIDO ODS柱(4.6 mm×150 mm,5μm);柱溫:25?C;流速:1.0ml/min;流動相:甲醇-0.1%磷酸(45∶55);檢測波長:276nm。(2):專屬性試驗:分別精密吸取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μl,在以確定的色譜條件下進樣測定,供試品色譜中在與黃芩苷對照品色譜峰保留時間一致處有相應的色譜峰,陰性對照色譜在黃芩苷峰保留時間一致處無色譜峰。(3)系統適應性試驗:按黃芩苷峰計算理論板數約為4600,黃芩苷與相鄰峰的分離度為8.14( 1.5),達到良好分離。(4)線性試驗:取黃芩苷對照品溶液,分別進樣1μl,2μl,5μl,10μl,25μl,測定峰面積,以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪製標準曲線。結果回歸方程為:Y=1.003 2 X +6.855 7,r=0.999 9,表明綠原酸在0.104 3～2.607 5μg範圍內與呈良好的線性關係。(5)重複性試驗:取同一批樣品,製備供試品溶液6份,進樣測定,結果平均含量為1.883mg·ml-1,RSD為0.99%(n=6),表明該方法重複性良好。(6)穩定性試驗:精密吸取同一份供試品溶液,分別在1h,2h,4h,12h,24h進樣測定峰面積,結果RSD%=0.78%(n=5),表明樣品在24h內穩定。(7)範圍:製備最高限和最低限濃度的供試品溶液各3份;進樣測定,結果平均含量為1.771mg·ml-1,RSD為1.5%。(8)加樣回收率試驗:黃芩苷平均回收率為98.72%,RSD%為1.05%(n=6)。 結論:本文建立了測定肝淨注射液中黃芩苷含量的高效液相色譜方法,方法重複性和精密度良好,有助於肝淨注射液的標準化生產和質量控制。
