產品
產品名稱：肉桂鏈黴菌
拉丁文名稱：
Streptomycescinnamoneus
產地：美國ATCC,國產
上海麗臣生物科技有限公司專業銷售各類進口，國產菌株，菌株種類多達七千多種
文獻研究
肉桂鏈黴菌PLD基因原核表達載體構建及表達條件最佳化龔跟強
【摘要】：本文致力於研究一種被廣泛關注的重要工業用途的酶,即鏈黴菌(Stv.Cinnamoneum)來源的磷脂酶D。它對多種磷脂均具有水解和轉磷脂活性,可高效、持續轉化磷脂醯膽鹼(phosphatidylcholine,PC)生成磷脂醯乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)。因此磷脂酶D是很有前景的催化劑,可合成具有各樣生理功能的多種極性頭基的新型磷脂,廣泛套用於食品、化妝品和醫藥工業。然而,磷脂酶D因在微生物中的低產率已嚴重羈絆了其在理論及套用酶學方面的深入研究。在構建分泌磷脂酶D表達系統前,就已有許多研究學者試圖用大腸或畢赤酵母作為宿主菌在細胞內分泌表達磷脂酶D。然而,研究發現磷脂酶D對這些宿主細胞有極強的細胞毒性,一旦表達了有活性的磷脂酶D就會立即引發嚴重的細胞溶解,這很可能是活性磷脂酶D將宿主細胞膜中的磷脂降解所致。因此,很有必要研究磷脂酶D在原核宿主中分泌表達的可行性,為工業化生產提供一定的理論依據。本研究利用本身攜帶信號肽的pET-26b(+)、pEZZ18質粒作為表達載體,E.coliw+Rosetta、E.coliJM105作為宿主菌,Stv.Cinnamoneum來源的磷脂酶D基因作為擴增目的片段構建了原核表達系統,並成功的在細胞周質表達出具可溶活性的磷脂酶D。並進一步最佳化了諸如,誘導劑濃度、葡萄糖濃度和培養基組成等可影響磷脂酶D表達產量、活性的各種實驗參數。最終,構建的pEZZ18-PLD/JM105、pET26b(+)-PLD/W+Rosetta原核表達系統在葡萄糖添加終濃度均為0.5%,溫度分別為18℃、28℃,IPTG濃度為0.5mM,OD600值分別為0.75、0.85時目的蛋白PLD的表達含量達到最高,分別為0.8mg/L、1.1mg/L;活性則分別達到0.62×103U/L、0.86×103U/L。本研究構建的磷脂酶D原核表達系統使表達的磷脂酶D產量、活性都得到了進一步提高,雖然不夠理想,但仍可為磷脂酶D基礎理論研究和磷脂工業化生產提供一定的借鑑和參考。
【關鍵字】：肉桂鏈黴菌PLDE.colipET-26(b+)pEZZ18
【學位授予單位】：黑龍江八一農墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：Q786
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2009.223223
盤點質控菌株(二)
| 要搞好臨床微生物學檢驗質控，必須保存有一批標準菌株，作為對儀器、培養基、染色液、試劑和診斷血清的質控菌株，也可作為從事細菌檢驗的工作人員熟悉某些菌株的教具。 |
